.

Состояние глутатионового звена антиоксидантной системы крови практически здоровых людей с лор-паталогиями, проживающих в различных районах города Кра

Язык: русский
Формат: дипломна
Тип документа: Word Doc
0 3183
Скачать документ

1

ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО ПО ОБРАЗОВАНИЮ

ФОУ ВПО «СИБИРСКИЙ ФЕДЕРАЛЬНЫЙ УНИВЕРСИТЕТ»

ИНСТИТУТ ФУНДАМЕНТАЛЬНОЙ БИОЛОГИИ И БИОТЕХНОЛОГИИ

Кафедра биохимии и физиологии человека и животных

А.В.Тимохина

Студентка V курса

СОСТОЯНИЕ ГЛУТАТИОНОВОГО ЗВЕНА АНТИОКСИДАНТНОЙ СИСТЕМЫ КРОВИ ПРАКТИЧЕСКИ
ЗДОРОВЫХ ЛЮДЕЙ И ЛЮДЕЙ С ЛОР-ПАТОЛОГИЯМИ, ПРОЖИВАЮЩИХ В РАЗЛИЧНЫХ
РАЙОНАХ ГОРОДА КРАСНОЯРСКА

(дипломная работа)

Допустить к защите:

Зав.кафедрой, д.м.н., проф.

А.А.Савченко ____________Научный руководитель:

к.б.н., доцент

Т.Н. Субботина ___________

Красноярск 2008

СОДЕРЖАНИЕ

Список сокращений 3

Введение 4

Глава 1. Обзор литературы 6

1.1. Уровень антропогенной нагрузки на здоровье населения в условиях
промышленного города 6

1.2. Активные формы кислорода: свойства и механизмы образования 9

1.3. Характеристика антиоксидантной системы 15

Глава 2. Материалы и методы 24

2.1. Объект исследования 24

2.2. Приготовление эритроцитов 25

2.3. Определение содержание гемоглобина 25

2.4. Определение количества восстановленного глутатиона…………………26

2.5. Определение активности глутатионпероксидазы 28

2.6. Определение активности глутатион-S-трансферазы 29

2.7. Определение активности глутатионпероксидазы 30

2.8. Статистическая обработка результатов 32

Глава 3. Результаты исследований и их обсуждение 33

3.1. Анализ содержания GSH и активности глутатионзависимых ферментов в
эритроцитах крови практически здоровых людей и людей с ЛОР-заболеваниями
33

3.2. Анализ содержание GSH и активность глутатионзависимых ферментов в
эритроцитах крови практически здоровых людей, проживающих в различных по
уровню загрязнения районах г.Красноярска 37

3.3. Анализ содержание GSH и активность глутатионзависимых ферментов в
эритроцитах крови здоровых мужчин и женщин 40

3.4. Содержание GSH и активность глутатионзависимых ферментов в
эритроцитах крови практически здоровых людей различного возраста 41

Выводы 44

Список литературы 45

Summary 52

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

АФК – активные формы кислорода

АОС – антиоксидантная система

ДНК – дезоксинуклеиновая кислота

КрАЗ – Красноярский Алюминиевый Завод

ПОЛ – перекисное окисление липидов

ПДК – предельно допустимая концентрация

РНК – рибонуклеиновая кислота

ТЭЦ – топливо-энергитический центр

цАМФ – цикло-аденозинмонофосфат

GSH – восстановленный глутатион

GPO – глутатионпероксидаза

GR – глутатионредуктаза

GST – глутатион-S-трансфераза

NADP – никотинамидадениндинуклеотидфосфат окисленный

NADFH – никотинамидадениндинуклеотидфосфат восстановленный

СРО – свободнорадикальное окисление

NRF – ядерный респираторный фактор

ВЕДЕНИЕ

В последние десятилетия в связи с огромным развитием промышленности
экология индустриальных городов значительно ухудшилась, это результат
больших техногенных выбросов предприятий стоящих на территории городов
или вблизи них [Иванова с соавт., 2001].

По степени загрязнения атмосферы город Красноярск входит в число
наиболее загрязненных городов Российской Федерации. На территории города
располагаются крупные предприятия, которые являются основными
поставщиками загрязняющих веществ в атмосферу города, к таким
предприятиям относятся две ТЭЦ, алюминиевый, цементный,
целлюлозно-бумажный, фармацевтический заводы [Симонова, 2002]. Только
ОАО «Красноярский Алюминиевый завод» имеет объемы выбросов в атмосферу в
размере 58,6 тыс. в год. Основными компонентами химического загрязнения
окружающей среды от КрАЗа являются: фтористый водород, плохорастворимые
неорганические фториды, оксиды алюминия, оксид углерода бенз(а)пирен,
сернистый ангидрид [Игамбердиев, 2004]. Превышение ПДК наблюдается по
фторидам газообразным – до 2,79 раз; по бенз(а)пирену – до 4,42 раз; по
плохо растворимым фторидам – до 3,16 раз. При этом уровень загрязнения
атмосферы жилой зоны города по фторидам газообразным составил 1,19-1,57
ПДК на 2003 год [Реброва, 2003]

По данным ряда авторов фтор и его производные в умеренных дозах является
необходимым элементом живых организмов, наибольшее его содержание
отмечено в зубах и костях, низкие концентрации – повышают устойчивость
зубов к кариесу, стимулируют кроветворение, репаративные процессы при
переломах костей и реакции иммунитета, участвуют в росте скелета,
избыточное поступление фтора в организм вызывает флюороз. При
ингаляционном поступлении в организм газообразных соединений фтора и
содержащих фтор аэрозолей возникают атрофические изменения слизистой
оболочки верхних дыхательных путей и бронхов, возможно развитие ринита,
фарингита, ларингита [Богданов, Гембицкий, 1975].

Дыхательная система является входными воротами для попадания в организм
поллютантов техногенного происхождения. Действия пылевых частиц на
респираторные органы вызывает образование большого числа активных форм
кислорода (АФК), и приводят к развитию окислительного стресса.
Антиоксидантная система осуществляет защиту организма от пагубного
действия прооксидантов и ограничивает развитие окислительного стресса
[Ковальчук, 2004].

ЦЕЛЬ: оценить состояние глутатионового звена антиоксидантной системы в
эритроцитах крови практически здоровых людей и людей с
ЛОР-заболеваниями, проживающих в различных по уровню загрязнённости
районах города Красноярска.

ЗАДАЧИ РАБОТЫ:

1. Изучить содержание GSH и активность GPO, GST и GR в эритроцитах крови
практически здоровых людей и людей с хроническим ЛОР-заболеваниями.

2. Определить содержание GSH и активность GPO, GST и GR в эритроцитах
крови практически здоровых людей проживающих в различных по уровню
загрязнения районах г. Красноярска.

3. Провести сравнительный анализ содержания GSH и активности GPO, GST и
GR в эритроцитах крови практически здоровых мужчин и женщин.

4. Выяснить содержание GSH и активность глутатионзависимых ферментов в
эритроцитах крови практически здоровых людей различного возраста,
проживающих в районах с разной техногенной нагрузкой г. Красноярска.

Работа выполнена на базе кафедры биохимии и физиологии человека и
животных Института фундаментальной биологии и биотехнологии Сибирского
федерального университета.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Уровень антропогенной нагрузки на здоровье населения в условиях
промышленного города

Анализ исследований за последнее десятилетие показал, что атмосферный
воздух загрязняется вследствие образования загрязняющих веществ в
концентрациях, превышающих нормативы качества или уровня естественного
содержания. Мощность антропогенного воздействия на атмосферу
увеличивается с каждым годом. За последние 25 лет ее техногенная
запыленность возросла на 70%. Ежегодно, в результате деятельности
человека, в атмосферу выбрасываются миллионы тонн загрязняющих веществ:
диоксиды серы, оксидов азота, углерода, хлорфторуглероды (фреоны),
которые отрицательно действуют на физико-химические свойства атмосферы и
на здоровье людей [Пинигин, 1991; Новиков,1999].

Наиболее активными поставщиками поллютантов – веществ, загрязняющих
атмосферу, являются автомобили, коксохимические, цементные,
нефтеперерабатывающие, сталеплавительные, целлюлозобумажные,
металлургические заводы, ТЭЦ, то есть отрасли, без процветания которых
современный человек не мыслит своего существования [Онищенко, 2003].

Практически каждый поллютант является высокотоксичным веществом,
постепенно разрушающим здоровье человека. Так, например, при сгорании
угля и мазута выделяется двуокись серы, она вызывает легочные и
аллергические заболевания, окись углерода, образующаяся при сгорании
всех видов топлива, поражает сердечно-сосудистую систему, углеводороды,
содержащиеся в выхлопных газах автомобилей, канцерогены, пылевидные
отходы (цементный завод выбрасывает около 15 тонн пыли в сутки)
провоцирует развитие бронхиальной астмы, заболеваний легких [Савин,
2001].

Как известно, человек подвержен экологическому влиянию не только в
широком смысле понимания этого термина как окружающей человека среды, но
и непосредственно во время его производственно – профессиональной
деятельности. Трудовая деятельность человека не только ухудшает качество
среды, но и обеспечивает условия труда, которые, являясь существенным
фактором части окружающей среды (производственной среды), зачастую
оказывают негативное влияние на работающего человека [Haglof, 2003].
Абсолютные величины предельно допустимых концентраций (ПДК) одних и тех
же веществ в воздухе рабочей зоны от нескольких десятков до нескольких
тысяч раз выше среднесуточных ПДК для атмосферы [Кучма, 2002]. Поэтому
суммарная нагрузка вредными веществами на рабочего во столько же выше по
сравнению с нагрузкой на население в целом. Наиболее распространенным
профессиональным заболеванием рабочих алюминиевого производства является
хроническая фтористая интоксикация – профессиональный флюороз, который
составляет 70 % всех профессиональных заболеваний в данной области
[Коцнельсон с соавт., 2000]. Обязательным проявлением профессионального
флюороза является не только остеосклероз, но и
дегенеративно-дистрофические изменения опорно-двигательного аппарата по
существу возрастного характера, что развиваются они намного раньше и
носят не только двухсторонний, но и симметричный характер. Явно
опережающей хронологические сроки наступление кардинального признака
старения (вероятности смерти по мере взросления) является и
демографическая ситуация. Так продолжительность жизни рабочих
алюминиевого завода составляет около 44 лет. Сроки развития
профессионально флюороза зависят в большей степени от возраста начала
работы в контакте с фтористыми соединениями и мышечных нагрузок [Гичев,
2002].

Изучение закономерностей формирования здоровья населения, проживающего в
зоне влияния выбросов алюминиевых производств, остается актуальной
гигиенической задачей. Как известно, основными вредными факторами
алюминиевого производства является фтор, его соли и фтористый водород.
По данным ряда авторов уровень загрязнения атмосферного воздуха
фтористыми соединениями в зоне влияния выбросов алюминиевого завода
превышает ПДК в 1,6-2,1 раза. Фтористые соединения так же обнаруживаются
в воде и почве и превышают контрольные в 5 раз [Иванова с соавт., 2001].
Токсичные соединения фтора в значительном количестве поступают через
дыхательные пути, с продуктами питания, питьевой водой. Имеется ряд
исследований о влиянии фтористых соединений на состояние перекисного
окисления липидов мембран клеток и антиоксидантной защиты [Cavalca, et
al., 2001]. Длительное воздействие на организм токсичных соединений
фтора, фтористоводородной кислоты приводит к формированию выраженных
функционально-структурных нарушений, к угнетению биоэнергетического
обмена в эритроцитах, белково-образовательной функции печени, усилению
пролиферативно-клеточной реакции. Высокая реакционность фтора делает
возможным его проникновение через защитные барьеры организма, нарушая
целостность мембран, усиливая процессы липопероксидации. Результаты ряда
исследований свидетельствую о том, что фтор и его соединения вызывают
системное поражение организма, которое проявляется рядом специфических
заболеваний [Кацнельсон с соавт., 2000].

В литературе приводятся данные, что для интоксикации фтором характерно
разнообразное воздействие на обменные процессы. Этот элемент обладает
высоким сродством к некоторым элементам, например, кальцию и магнию, с
которыми он комплексуется в клетке [Мамырев, Богатова, 2002]. Фтор
способен выступать в качестве регулятора ферментативной активности в
клетке. Он обладает ингибирующим действием на металлопротеины. Это,
по-видимому, обусловлено тем, что он представляет собой один из наиболее
“жестких” лигандов, то есть, способен образовывать прочные комплексы с
ионами “жестких” металлов, к которым относятся почти все металлы в
биологических системах [Генкин, Глотов, Ждахина, 1983]. В силу этого
обстоятельства при увеличении концентрации фтор способен “вклиниваться”
в структуру биокоординационных соединений и замешать некоторые
ионы-лиганды (например, гидроксил-ионы), в результате чего изменяется
конформация соединения, что и приводит к “ухудшению” взаимодействия
фермента с субстратом, то есть к ингибированию ферментативной активности
[Ройт,1991]. Наибольшей прочностью отличается соединение фтора с ионами
магния, в силу чего большинство Мg2+-зависимых ферментных систем по
своей чувствительности к ингибирующему воздействию фтора в несколько раз
превосходят ферменты, активируемые другими ионами, например
Мn2+.Существуют данные о влиянии фтора на активность некоторых энзимов,
например липаз, через их лабильный компонент – кофермент [Разумов,
1997]. Из литературных источников известно, что фтор способен оказывать
ингибирующее влияние на ферменты цикла трикарбоновых кислот и цепи
переноса электронов: НАДН- зависимые дегидрогеназы, цитохромоксидазу,
сукцинатдегидрогеназу, -кетоглутаратдеги-дрогеназу. Наибольшей
чувствительностью из них к фтору обладает сукцинатдегидрогеназа [Abiaka,
2000].

1.2. Активные формы кислорода: свойства и механизмы образования

Обязательным атрибутом нормальной аэробной жизни является генерация АФК
– прооксидантов. Функционирование и развитие клеток не могло быть
возможным без существования защитных систем, к которым относиться
специализированные ферментативные и неферментативные актиоксиданты
[Меньщикова c соавт, 2006]. Постоянное образование прооксидантов
уравновешенно их дезактивацией антиоксидантами, поэтому для поддержания
гомеостаза необходимо непрерывная генерация антиоксидантной способности.
Отсутствие или сбой этой непрерывности приводят к развитию
окислительного стресса, к возникновению и накоплении окислительных
повреждений, что сопровождает ряд физиологических процессов – таких как
воспаление, реперфузионное поражение тканей, бронхо-легочное
заболевание, старение и др.

В живых организмах существует два разных источника АФК: радикальные
окислительные реакции и металопротеиновые ферментативные системы. В
обоих случаях молекулярный кислород выступает акцептором электронов.
Наличие у молекулярного кислорода двух неспаренных электронов
существенно ограничивает его реакционную способность. В процессе
эволюции у живых организмов выработались специальные ферментативные
системы, которые восстанавливают молекулярный кислород, перенося на него
один, два или четыре электрона. Главные ферменты, которые осуществляют
метаболизм кислорода в организме млекопитающих – оксидазы и оксигеназы.
В активных центрах этих ферментов кислород превращается в этих продуктах
и не выходит в окружающую среду, но при этом они не подвергают опасности
органические молекулы, а опасными являются активные формы кислорода,
которые образуются как побочные вещества в ходе этих превращений
[Меньщикова c соавт, 2006].

Главные АФК: супероксидный радикал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, перекись
водорода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, гидроксильный радикал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, синглетный кислород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, гипогалоиды
алкоксильный радикал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и перекисный радикал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.

Характеристика основных форм АФК

Супероксидный радикал. Присоединение одного электрона к молекуле
кислорода в основном состоянии приводит к образованию супероксидного
анион радикала
(picscalex100010009000003f500000002001c000000000005000000090200000000050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), который при
взаимодействии с протоном переходит в гидроперекисный радикал
(picscalex100010009000003d100000002001c000000000005000000090200000000050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) [Бурлакова с
соавт., 1992]. В живых системах супероксидный анион является
промежуточным продуктом многих биохимических реакций – окисление тиолов,
флавинов, хинонов, катехоламинов, птеринов, ксонобиотиков. Но основные
источники его образование – ферментативные системы: NADFH-оксидаза
фагоцитирующих клеток, ксантиноксидаза, митохондриальная
цитохром-с-оксидаза и микросомальные монооксигеназы. При активации
фагоцитов в очаге воспаления генерация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 служит пусковым
звеном целого каскада реакций, приводящих к образованию других форм АФК.
Для регуляции уровня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 в клетках
служит высокоспецифичный фермент – антиоксидант супероксиддисмутаза,
которая существенно ускоряет реакции дисмутации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 до перекиси
водорода [Зенков, Меньщикова, 2004].

Перекись водорода. Присоединение двух электронов к молекуле кислорода
или одного электрона к аниону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 сопровождается
образованием двухзарядного аниона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, который в свободном состоянии не существует,
присоединяя протоны он переходит в гидроперекисный анион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 [Brune, Messmer, 1995]. Перекись водорода – слабый
окислитель, в отсутствии каталазы и ионов металлов переменной валетности
она относительно стабильна и может мигрировать в клетке и ткани. В живых
организмах источниками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 служат ферментативные реакции с оксидазами, реакция
дисмутации, катализируемая SOD [Зенков, Меньщикова, 2004].

Клетки млекопитащих достаточно устойчивы к воздействию
picscalex100010009000003d900000002001c0000000000050000000902000000000500
0000020101000000050000000102ffffff00050000002e0118000000050000000b020000
0000050000000c022002e0031200000026060f001a00ffffffff000010000000c0ffffff
a6ffffffa0030000c60100000b00000026060f000c004d61746854797065000050001c00
0000fb0220ff0000000000009001000000000402001054696d6573204e657720526f6d61
6e00d89ff377e19ff3772020f577ec0c6644040000002d01000008000000320ae0012703
01000000327908000000320ae0018a010100000032791c000000fb0280fe000000000000
9001010000000402001054696d6573204e657720526f6d616e00d89ff377e19ff3772020
f577ec0c6644040000002d01010004000000f001000008000000320a80010d0201000000
4f7908000000320a800146000100000048790a00000026060f000a00ffffffff01000000
00001c000000fb021000070000000000bc02000000cc0102022253797374656d0044ec0c
664400000a0021008a010000000000000000bcf31200040000002d01000004000000f001
0100030000000000, благодаря наличию глутатионпероксидазной и каталазной
ферментативных систем, первая из которых эффективно работает при малых
концентрациях перекиси, вторая – при высоких.

Гипогалоиды. Образуются главным образом в результате ферментативной
реакции перекиси водорода с галидами, катализируемой миелопероксидазой,
пероксидазой эозинофилов, которые различаются по структуре и субстратной
специфичности. Основным продуктом миелопероксидазы является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,
пероксидаза эозинофилов катализирует образование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иpic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.
Гипогалоиды инактивируют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-антитрипсин, переводят коллагеназу в активную
форму Б, окисляют лейкотриены, иммуноглобулины, альбумин, церулоплазмин,
трансферрин. Вызывают структурную модификацию и инактивацию
picscalex1000100090000039d00000002001c0000000000050000000902000000000500
0000020101000000050000000102ffffff00050000002e0118000000050000000b020000
0000050000000c02c00140021200000026060f001a00ffffffff000010000000c0ffffff
c6ffffff00020000860100000b00000026060f000c004d61746854797065000030001c00
0000fb0280fe0000000000009001010000000402001054696d6573204e657720526f6d61
6e00d89ff377e19ff3772020f5777b0e669e040000002d01000008000000320a60012e00
0200000043750a00000026060f000a00ffffffff0100000000001c000000fb0210000700
00000000bc02000000cc0102022253797374656d00007b0e669e00000a0021008a010000
0000ffffffffbcf31200040000002d01010004000000f0010000030000000000,picscal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-SOD могут как
индуцировать, так и ингибировать процессы ПОЛ.

Гидроксильный радикал является наиболее реакционноспособным АФК,
образующимся в биологических системах, он может разрывать любую
углеродную связь [Андреев, 1999]. Образование ОН-радикала показано в
реакциях окисления арахидоновой кислоты, в реакции Габера-Вейса, при
микросамальном окислении, в реакциях с флавиновыми ферментами и
убихиноном, но основным источником OH-радикалов в биологических системах
служит реакция Фентона с участием металлов переменной валентности,
главным образом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:
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Обратное восстановление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 возможно в
реакции с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:
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а также при взаимодействии с аскорбиновой кислотой, глутатионом,
цистеином и другими окисляющимися соединениями [Зенков, Меньщикова,
2004].

Синглетный кислород. В кислороде внутримолекулярно происходит
перестройка электронов и возникает более высокий энергетический уровень
[Владимиров, 1998]. Источником синглетного кислорода являются реакции
фотосенсибилизированного окисления биологических субстратов, при не
фотохимических реакциях не ферментативная дисмутация супероксидных
радикалов, протекающие с образованием перекиси водорода.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 обладает
высокой химической активностью, особенно по отношению к молекулам,
содержащим участки повышенной электронной плотности.

Алкоксильные и перекисные радикалы. При развитии радикальных
окислительных процессов взаимодействие органических радикалов
молекулярным кислородом приводят к образованию перекисных
радикаловpicscalex100010009000003d100000002001c0000000000050000000902000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,
которые с алкоксильными радикалами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 могут образовываться в реакциях разложения
перекиси в присутствии ионов металлов переменной валентности. По
физико-химическим свойствам алкоксильные и перекисные радикалы это очень
гетерогенный класс соединений, включающий высокореакционный OH-радикал и
мало активные радикалы фенольных антиоксидантов. Взаимодействие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 и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 с
углеводородами, приводящие к образованию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и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 –
это наиболее медленная стадия развития радикальных окислительных
процессов [Владимиров, 1998].

Биологический эффект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и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 реализуется
через повреждающее действие на белки, ферменты, нуклеиновые кислоты,
через продукты ПОЛ – органические перекиси, альдегиды, кетоны, эпоксиды,
которые высокотоксичны для клеток. Ингибиторы – аскорбиновая кислота,
мочевая кислота, убихинон, селен,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-токофер
ол [Андреев, 1999].

Все формы АФК обладают высокой цитотоксичностью для клеток и клеточных
образований. Можно выделить четыре мишени окислительной цитотоксической
атаки АФК: индукция процессов ПОЛ в биологических мембранах, повреждение
мембрансвязанных белков, инактивация ферментов и повреждение ДНК клеток.

Аминокислоты, из которых состоят белки, подвержены окислительному
действию АФК, что приводит к трем вариантам изменения физико-химических
свойств белков: фрагментации, агрегации и повышению чувствительности к
протеолизу. В первую очередь воздействию кислородных радикалов
подвергаются остатки пролина гистидина и аргинина. Окислительное
повреждение приводит к денатурации и агрегации белков (хрусталика
глаза). Агрегация белков связана со способностью АФК образовывать
межмолекулярные сшивки. В результате денатурации белков нарушается их
конформация, и они становятся более уязвимыми к действию
протеолитических ферментов [Зенков, Меньщикова, 2004].

Окислению АФК в первую очередь подвергаются SН-содержащие группы белков;
их окисление приводит к снижению содержания восстановленных и повышению
уровня окисленных SН-групп, поэтому соотношение окисленных и
восстановленных SН-групп белков может быть использовано в качестве
показателя развития окислительного стресса. Наиболее подвержена
окислительному стрессу Са2+-АТФаза, ее повреждение приводит к нарушению
транспорта кальция через мембрану [Владимиров, 1999].

Карбонильные группы и гидроперекиси, образующиеся при окислении белков,
также является показателем свободнорадикального окисления.

Окисление липидных молекул приводит к необратимому изменению мембранных
структур, нарушению их проницаемостью для ионов. Наиболее подвержены
перекисному окислению входящие в состав мембран ненасыщенные жирные
кислоты: линолевая, арахидоновая, докозагексаеновая [Козлов, 2006].
Одним из важнейших следствий избыточного образования АФК является
избыточная и неконтролируемая в этих условиях активация процессов ПОЛ.
Процессы ПОЛ можно условно подразделить на три последовательных этапа,
или фазы развития: процессы зарождения цепей, процессы развития цепных
реакций и обрыв цепей. На стадии зарождения цепей под действием
свободных радикалов кислорода, ионизирующей радиации, ультрафиолетового
облучения и ряда химических веществ, относящихся к прооксидантам,
происходит образование органических радикалов (R).

picscalex1000100090000033d01000002001c0000000000050000000902000000000500
0000020101000000050000000102ffffff00050000002e0118000000050000000b020000
0000050000000c024002e00d1200000026060f001a00ffffffff000010000000c0ffffff
b7ffffffa00d0000f70100000b00000026060f000c004d61746854797065000050001c00
0000fb0220ff0000000000009001000000000402001054696d6573204e657720526f6d61
6e00d89ff377e19ff3772020f5775a116677040000002d01000008000000320af400380d
010000002a7908000000320a0002250d01000000327908000000320af400e00801000000
2a7908000000320af400500101000000317908000000320a000248010100000032791c00
0000fb0280fe0000000000009001010000000402001054696d6573204e657720526f6d61
6e00d89ff377e19ff3772020f5775a116677040000002d01010004000000f00100000800
0000320aa001f70a02000000484f08000000320aa001dd0701000000524f08000000320a
a001690302000000524808000000320aa0012e00010000004f481c000000fb0280fe0000
000000009001000000020002001053796d626f6c000052110af2a0f11200d89ff377e19f
f3772020f5775a116677040000002d01000004000000f001010008000000320aa001c509
010000002b4808000000320aa001f70501000000ae4808000000320aa001370201000000
2b480a00000026060f000a00ffffffff0100000000001c000000fb021000070000000000
bc02000000cc0102022253797374656d00775a11667700000a0021008a01000000000100
0000bcf31200040000002d01010004000000f0010000030000000000

picscalex1000100090000036101000002001c0000000000050000000902000000000500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picscalex1000100090000035901000002001c0000000000050000000902000000000500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На следующей стадии радикал быстро взаимодействует с кислородом, который
выступает в качестве акцептора электронов. В результате происходит
образование пероксирадикала (RО2), который атакует ненасыщенные липиды.
Возникновение в результате этой реакции органических перекисей и нового
радикала (R) способствует продолжению окислительных реакций,
приобретающих цепной характер:

R + О2
picscalex1000100090000039d00000002001c0000000000050000000902000000000500
0000020101000000050000000102ffffff00050000002e0118000000050000000b020000
0000050000000c026001e0011200000026060f001a00ffffffff000010000000c0ffffff
26000000a0010000860100000b00000026060f000c004d61746854797065000030001c00
0000fb0280fe0000000000009001000000020002001053796d626f6c00007e110add40f1
1200d89ff377e19ff3772020f577e91066ef040000002d01000008000000320a00013400
01000000ae790a00000026060f000a00ffffffff0100000000001c000000fb0210000700
00000000bc02000000cc0102022253797374656d0000e91066ef00000a0021008a010000
0000ffffffff5cf31200040000002d01010004000000f0010000030000000000RО2
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Органические перекиси (RООН) включаются в процесс генерации радикалов, в
присутствии металлов переменной валентности (меди, кобальта, марганца,
железа) происходит образование реакционного алкоксильного радикала:
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Часть образующихся органических радикалов взаимодействует друг с другом,
при этом происходит образование неактивных молекул, что обрывает ход
реакций свободнорадикального окисления. Гидроперекиси липидов способны
подвергаться нерадикальным окислительным превращениям, что приводит к
образованию первичных (диеновые коньюгаты, диальдегиды), промежуточных
(основания Шиффа) и конечных продуктов ПОЛ, а также спиртов, кетонов и
альдегидов. Обрыв цепных реакций перекисного окисления возможен при
взаимодействии радикалов со специализированными ферментными системами, а
также с рядом низкомолекулярных веществ, совокупно формирующих
биохимический компонент антиоксидантной системы организма [Меньщикова с
соавт., 2006].

Одним из конечных продуктов ПОЛ является насыщенные низкомолекулярные
углеводороды (этан, гексан, пентан), которые в нормальных условиях
переходят в газообразное состояние.

Идентифицировано более 20 типов окислительных повреждений молекул
нуклеиновых кислот: различные повреждение оснований, возникновение одно-
и двух цепочечных разрывов, сшивок и хромосомных аберраций. Прямое
действиеpicscalex100010009000003f500000002001c00000000000500000009020000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 и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 на ДНК не вызывает повреждения оснований или
образования сшивок между основаниями. Основным повреждающим агентом
выступает OH-радикал, который эффективно взаимодействует с
дезоксирибозой, пуриновыми и пиримидиновыми основаниями. Синглетный
кислород более специфично, чем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, взаимодействует с гуанином. Перексинитрит
вызывает нитрозилирование и дезаминирование аминогрупп в основаниях ДНК,
при этом 8-нитрогуанин является индикатором повреждающего действия
пероксинитрита. В условиях окислительного стресса в наибольшей степени
повреждается ДНК митохондрий, что связано с низкой активностью систем
репарации и низким содержание гистоновых белков, оказывающие защитное
действие [Зенков, Менщикова, Шергин, 1993].

1.3. Характеристика антиоксидантной системы

В процессе эволюции в клетках для защиты от АФК выработались
специализированные системы: ферментативная антиоксидантная система (АОС)
и неферментативная АОС. В качестве неферментативной АОС могут выступать:
жирорастворимые антиоксиданты (витамин Е, в-каротин, убихиноны)
[Абрамова, 2004], водорастворимые (аскорбат, рутин, глутатион).
Гидрофобные антиоксиданты локализованы в биомембраннах, гидрофильные – в
цитозоле клетки.

Ферментативная АОС включает: супероксиддисмутазу (SОD), катализирующую
реакцию дисмутации О2? в Н2О2, каталазу (CАТ), разлагающей Н2О2,
глутатионпероксидазу (GPO), глутатион-S- трансферазу (GSТ),
глюкозо-6-фосфатдегидрогеназу (G6FD), глутатионредуктазу (GR),
глутатионзависимые ферменты удаляют органические перекиси [Брискин,
Рыбаков 2000].

Супероксиддисмутаза имеет несколько изоферментных форм, различающихся
строением активного центра. Медь-цинковая форма чувствительна к цианиду
и содержится в цитозоле и межмембранном пространстве митохондрий клеток
эукариот, марганецсодержащая форма локализована в митохондриях клеток
эукариот, а так же бактерий, экстрацеллюлярная высокомолекулярная форма
SOD (Э-SOD) [Биленко,1999]. Э-SOD обладает высоким сродством к гепарину
и хорошо связывается с гепаринсульфатом гликокаликса эндотелиоцитов.
Нативная форма SOD выдерживает нагревание при 100єС в течение одной
минуты, устойчив к колебаниям значений pН в широком диапазоне. SOD
существенно ускоряет реакцию дисмутации О2?, обрывая тем самым опасную
цепь свободнорадикальных превращений кислорода:

О2? + О2? ? H2O2 + O2

HO + HO. ? H2O2 + O2

HO.2 + Н+ ? H2O2 + O2

В определенных условиях медьсодержащая форма SOD может взаимодействовать
с перекисью водорода и выступать в качестве прооксиданта, инициируя
образование радикалов – супероксида и гидроксила:

Cu2+-СОД + H2O2 ?? Cu+-СОД + 2Н+ + О2?

Cu+-СОД + H2O2 ?? Cu2+-СОД + ОН. + ОН+

СОД играет важную роль в защите клеток от действия супероксид-анион
радикала, стабилизирует клеточные мембраны, предотвращая процессы ПОЛ,
снижая уровень О2?, она защищает от его дезактивирующего действия CAT и
GPO [Александров,2007].

Регулирующее влияние на активность SOD оказывают глутатион, цистеин,
другие SH-содержащие соединения, а также опосредованно ферменты
глутатионового обмена [Зенков, Меньщикова, 2004].

Каталаза – фермент, участвующий в детоксикации нерадикальной активной
формы кислорода – Н2О2. Эта гемсодержащий фермент, локализованный
преимущественно в пероксисомах клеток. Большая молекулярная масса
фермента препятствует его проникновению через клеточную мембрану
[Биленко, 1999]. Разложение Н2О2 каталазой осуществляется в два этапа.

CAT + Н2О2 ? CAT – Н2О2

CAT – Н2О2 + Н2О2 ? CAT + 2Н2О + О2

При этом в окисленном состоянии каталаза работает и как пероксидаза,
катализируя окисление спиртов или альдегидов:

CАТ – Н2О2 + >CHOH ? CАТ + 2Н2О + >C=O

Каталаза ингибируется азидом, цианидом, пероксидом водорода в высоких
концентрациях и некоторыми органическими гидроперекисями. Каталаза может
выступать источником образования АФК. 0,5% кислорода, образующегося в
результате разложений перекиси водорода, возникает в возбужденном
синглетном состоянии.

Глутатионпероксидаза – фермент, служащий для инактивации перекиси
водорода в клетках высших животных. GPO– гликопротеин, имеющий в
активном центре четыре атома селена. Он является гидрофильным
соединением, что затрудняет его проникновение в липидный слой мембран,
основная часть фермента локализована в цитозоле, а остальная – в
митохондриях. GPO имеет селеновые изоферменты: внеклеточное GPO,
обнаруженная в плазме и молоке, GPO– G1, выделенная из цитозоля клеток
печени и кишечника, а также неселеновый изофермент, идентичный GSТ.

«Классическая» GPO представляет собой тетрамер, состоящий из четырех
идентичных сферических субъединиц. Каждая субъединица содержит по одному
атому селена, на тетрамер имеется два активных GSH-связывающих центра.
При уменьшении уровня GPO снижается устойчивость организма к
окислительному поражению, что может приводить к развитию
свободнорадикальной патологии [Белоусов, Суслова, Трунова, 1998].

GPO катализирует реакцию восстановления глутатионом нестойких
органических гидропероксидов, включая гидропероксиды полиненасыщенных
жирных кислот, стабильные соединения – оксикислоты:

2GSH + ROOH ? GSSG + ROH + H2O

Все GPO, подобно каталазе, способны также утилизировать перекись
водорода:

2GSH + H2O2 ?GSSG + 2H2O

Также селенсодержащая GPO участвует в обезвреживании пероксинитрита:

2GSH + ONOO- ? GSSG + NO + H2O

Сродство GPO к Н2О2 выше, чем у каталазы, поэтому первая более
эффективно работает при низких концентрациях перекиси водорода, в то же
время в защите клеток окислительного стресса, вызванного высокими
концентрациями Н2О2, ключевая роль принадлежит каталазе. В целом же, GPO
значительно важнее, чем каталаза, так как каталаза сосредоточена в
микросомах, а GPO – в цитозоле и митохондриях, сродство GPO к пероксиду
водорода значительно выше, поэтому Н2О2 элиминируется GPO, в некоторых
тканях каталаза почти ответствует и GPO играет главную роль в валовом
метаболизме Н2О2 [Зубакова, Варакина, Николенко, 1999]. В клетках
млекопитающих также обнаружен изофермент GPO, названный «GPO
гидроперекисей фосфолипидов». Изофермент помимо Н2О2 и липидных
гидроперекисей способен восстанавливать гироперекиси фосфолипидов, он
эффективно взаимодействует с гидроперекисями фосфотидилхолина,
холестерина и эфира холестерина в мембранах и липопротеинах низкой
плотности. Совместно с токоферолом GPO гидроперекисей фосфолипидов
практически полностью подавляет ПОЛ в биомембранах.

Активность GPO в живых клетках увеличивается при действии ионизирующей
радиации, интоксикации этанолом, акрилонитрилом, при Е-авитаминозе.
Особо важна роль GPO в условиях окислительного стресса, так как он
предупреждает возникновение и развитие пероксидации, устраняет ее
источники и продукты, GPO – является одним из важнейших компонентов
ферментативной АОС [Брискин, Рыбакова, 2000].

Глутатион-S-трансфераза входит в семейство ферментов, нейтрализующих
токсическое влияние различных гидрофобных и электрофильных соединений
путем их коньюгации с восстановленным глутатионом, GST локализованы
преимущественно в цитозоле клеток. Основная функция GST-защита клеток от
ксенобиотиков и продуктов ПОЛ посредством их восстановления,
присоединения к субстрату молекулы глутатиона или нуклеофильного
замещения гидрофобных групп:

ROOH + 2GSH ? ROH + GSSG + H2O

R + GSH ? HRSG

RX + GSH ? RSG + HX

GST способны восстанавливать гидроперокси-группы окисленных фосфолипидов
непосредственно в мембранах без их предварительного фосфолипидного
гидролиза свободными жирными кислотами. Этот фермент конъюгирует с GSН
токсичные продукты ПОЛ (ноненали, децинали, холестерин-б-оксид) и тем
способствуют их выведению из организма. Таким образом, GST является
важным компонентом антиоксидантной защиты, особенно от эндогенных
метаболитов, образующих при окислительном стрессе [Владимиров, 1998].

Глутатионредуктаза. Во многих реакциях, катализируемых GPO и GST, две
молекулы GST соединяются дисульфидной связью и образуют окисленный
глутатион. Для восстановления GSSG в клетках существует специальный
фермент – глутатионредуктаза [Зенков, Меньщикова, 2004].

ГР широко распространенный флавиновый фермент, поддерживающий высокую
внутриклеточную концентрацию GSH, катализируя обратимое NFDFH– зависимое
восстановление GSSG с образованием двух молекул GSH.

GSSG + NADFH + H+ ? 2GSH + NADF+

ГР содержится в основном в растворимой части клетки.

Глюкоза-6-фосфатдегидрогеназа. Для восстановления окисленного глутатиона
ГР в качестве донара водорода используется NADFH, который образуется в
пентозофосфатном пути в ходе глюкозо-6-фосфатдегидрогеназной реакции
[Андреев, 1999]

G6FD – фермент, катализирующий начальную реакцию пентозофосфатного пути:
восстановление глюкозо-6-фосфата в 6-фосфоглюконат. Она состоит из двух
типов субъединиц, которые состоят из 479 аминокислотных остатков, имеют
один и тот же СООН – концевой участок, но разные NH2-концы, Эти
субъединицы различаются по длине и последовательности аминокислот.
Реакцию, катализируемую G6FD, с кинетической точки зрения можно
рассматривать как двухсубстратную реакцию, протекающую с участием
субстрата и кофермента, выполняющего роль второго субстрата. Фермент
очень сильно ингибируется NADFH и ATF, по типу конкурентного
ингиирования.

Глутатион – трипептид (L-г-глутамил-L-цистеинилглицин), который при
физиологических значениях рН имеет две отрицательно заряженные
карбоксильные группы и положительно заряженную аминогруппу.

Наличие г-глутамильной связи защищает трипептид от деградации
внутриклеточными пептидазами, а сульфгидрильная группа цистеина может
служить донором электронов, придавая глутатиону свойства восстановителя
и способность удалять свободные радикалы. Одноэлектронная реакция GSH со
свободными радикалами приводит к образованию тиильного радикала GS.,
который при димеризации с другим GS. радикалом дает дисульфид глутатиона
(GSSG). Второй тип окислительно-восстановительных реакций, в которых
принимает участие глутатион – это реакции тиол-дисульфидного обмена
[Brune,1995]. При окислительно-восстановительных реакциях третьего типа
происходит двухэлектронное окисление с образованием интермедиата,
который затем реагирует со второй молекулой, идентичной первой или
отличной от нее. При этом в первом случае образуется GSSG, а во
втором-смешанный дисульфид.

В клетках всех типов GSH синтезируется в ходе двух последовательных
реакций, катализируемых г-глутамилцистеинсинтетазой (г-GCS) и
GSН-синтетазой (GS). г-GCS катализирует образование пептидной связи
между г-карбоксильной группой глутамата и б-аминогруппой цистеина.
Глутатионсинтетаза образует пептидную связь между б-карбоксильной
группой цистеина в составе г-глутамилцистеина и б-аминогруппой глицина.
Обе реакции являются ATF-зависимыми, имеют сходный каталитический
механизм и протекают через образование ацилфосфатного интетрмедиата
[Davies,1995].

Статус глутатиона определяется как общая концентрация глутатиона и
количественное соотношение между различными формами, в которых он
существует в клетке. Статус глутатиона обусловлен динамическим
равновесием между реакциями синтеза, деградации, транспорта, окисления и
восстановления и поэтому может изменяться в зависимости от преобладания
тех или иных реакций, что определяется состоянием клетки и окружающей
среды. Изменение статуса GSH может наблюдаться как при нормальных
физиологических ситуациях, так и при стрессах. Для ингибирования синтеза
GSH у эукариот широко используется ингибитор г-глутамилцистиинсинтетазы
[Gebhardt,1984].

Редокс-активность глутатиона при одновременной его устойчивости к
окислению кислородом, высокая концентрация и возможность поддержания в
восстановленном состоянии делают GSH важнейшим внутриклеточным
редокс-буфером. Редокс система глутатиона включает в себя сам глутатион,
GPO и ГSТ [Davies,1995].

GSH реагирует с очень большим числом электрофильных компонентов с
образованием GSH-конъюгатов. Эта реакция может происходить спонтанно или
катализироваться ферментами GSТ, затем коньюгаты деградируют до
относительно безвредных меркаптуровых кислот. Глутатион также участвует
в детоксикации некоторых реактивных альдегидов, которые могут
образовываться при окислительных процессах в клетках. У эукариот
глутатион играет ключевую роль в защите от окислительного стресса как
кофактор селенозависимых и независимых GPO (Рис. 2). При окислительном
стрессе идет интенсивное окисление GSH, и снижение соотношения GSH/GSSG
является одним из основных признаков окислительного стресса в клетках
[Brune,1995].

Защита живых организмов от окислительных повреждений не ограничивается
рассмотренными выше антиоксидантными системами, а осуществляется так же
большим количеством репарационных систем, специфическими
протеолитическими ферментами; макрофагами и гепатоцитами, эффективно
захватывающими окисленные липопротеины через специальные
«скэвенджнр-рецепторы». Эта еще раз свидетельствует о важности и
сложности окислительных процессов с участием АФК, протекающих в живом
организме.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Объект исследования

Объектом исследования явились эритроциты крови практически здоровых
людей, проживающих в Советском и Октябрьском районах г. Красноярска, а
так же эритроциты крови людей с ЛОР-патологиями.

Всего обследовано 131 человек в возрасте от 18 до 54 лет, забор
материала исследования проводился в клиническо-диагностической
лаборатории ГУ НИИ медицинских проблем Севера СО РАМН. Группу контроля
составили 102 практически здоровых человека, неболевших острыми
респираторными заболеваниями в течение последнего месяца и не имеющих
хронических ЛОР-заболеваний. Здоровые люди были отобраны в 2-х районах
города Красноярска ЛОР-врачом по данным клинического осмотра. Группа
людей с ЛОР-заболеваниями составила 29 человек, проживающих в различных
районах г. Красноярска.

Таблица 1

Характеристика материала исследования и объёма проведенных работ

Методы исследованияЗдоровыеЛОР-больныеВсегоОпределение содержания GSH в
эритроцитах крови

Определение активности GPO в эритроцитах крови

Определение активности GST в эритроцитах крови

Определение активности GR в эритроцитах крови

Определение содержания гемоглобина в эритроцитах крови91

89

90

67

9129

20

28

6

29120

109

118

73

120Всего428112540

Определение активности глутатионзависимых ферментов – GPO, GST и GR, а
так же содержание GSH проводили в упакованных эритроцитах крови (табл.
1).

2.2. Приготовление эритроцитов

Гепаринизированную кровь центрифугируют 20 минут при 3000 об/мин.
(1700g). После центрифугирования убирают слой плазмы и тонкую белую
лейкоцитарную пленку. Плазму отбирают отдельно и сохраняют. Оставшуюся
после отбора плазмы эритроцитарную массу трижды отмывают физиологическим
раствором (0,9%-ным NaCl) и центрифугируют по 15 минут при 3000 об/мин.
(1700g). Супернатант отбрасывают. Последнее центрифугирование проводят в
течение 20 минут для более плотной упаковки клеток [Авраамова, Титова,
1978].

2.3. Определение содержание гемоглобина

Содержание Hb определяют унифицированным гемиглобинцианидным методом с
использованием набора реактивов фирмы “Агат-Мед”.

Принцип метода заключается в следующем: Hb крови при взаимодействии с
железосинеродистым калием (красная кровяная соль) окисляется в Met-Hb,
образующий с ацетонциангидрином гемиглобинцианид (цианметгемоглобин),
оптическая плотность которого при 540 нм пропорциональна концентрации Hb
в образце крови [Меньшиков, 1987]. Содержание Hb в опытных образцах
выражали в граммах на литр упакованных эритроцитов.

Реактивы:

1. Трансформирующий реагент – сухая смесь натрий углекислый кислый,
1,0г, калий железосинеродистый, 200 мг.

2. Ацетонциангидрин.

3. Калибровочный раствор гемоглобин с концентрацией 120 г/л.

Ход определения

К 5 мл трансформирующего раствора добавляют 0,02 мл крови (разведение в
251 раз) или гемолизата, хорошо перемешивают. Определение проводят через
10 минут против холостой пробы
(трансфорpicscalex100010009000003510000000000120000000000050000000902000
0000005000000020101000000050000000102ffffff00050000002e01180000000500000
00b0200000000050000000c02200220011200000026060f001a00ffffffff00001000000
0c0ffffffa6ffffffe0000000c60100000b00000026060f000c004d61746854797065000
050000a00000026060f000a00ffffffff010000000000030000000000мирующего
раствора), окраска устойчива в течение не менее 1 часа.

При использовании фотоколориметра определение проводят в диапазоне длин
волн 500-560 нм (зелёный светофильтр). Калибровочный раствор гемоглобина
обрабатывают также, как и пробу цельной крови. Расчёт содержания
гемоглобина производят по формуле:

picscalex177010009000003400100000300170000000000050000000902000000000400
000002010100050000000102ffffff00040000002e011800050000003102010000000500
00000b0200000000050000000c02400480091200000026060f001a00ffffffff00001000
0000c0ffffffb9ffffff40090000f90300000b00000026060f000c004d61746854797065
0000e00009000000fa02000010000000000000002200040000002d010000050000001402
fc01b203050000001302fc01b30517000000fb0280fe0000000000009001010000cc0002
001054696d6573204e657720526f6d616e2043797200ccdd040000002d0101000a000000
320a80024c000200000048621601c00009000000320a6701de0301000000440016010900
0000320a8b03f703010000004400160117000000fb0220ff0000000000009001010000cc
0002001054696d6573204e657720526f6d616e2043797200ccdd040000002d0102000400
0000f001010009000000320ac701dc04010000004f00a20009000000320aeb03fd040100
00007800640010000000fb0280fe0000000000009001000000020002001053796d626f6c
0002040000002d01010004000000f001020009000000320a80027b02010000003d00d300
09000000320a8002070601000000b400d30017000000fb0280fe00000000000090010000
00cc0002001054696d6573204e657720526f6d616e2043797200ccdd040000002d010200
04000000f00101000c000000320a800209070300000031323000c000c000c0000a000000
26060f000a00ffffffff01000000000010000000fb021000070000000000bc02000000cc
0102022253797374656d00cc040000002d01010004000000f0010200030000000000,

где:

Hb – содержание гемоглобина в опытной пробе, г/л;

Dо – оптическая плотность опытной пробы;

Dx – оптическая плотность калибровочной пробы;

120 – содержание гемоглобина в калибровочном растворе, г/л.

2.4. Определение количества восстановленного глутатиона

Принцип метода основан на взаимодействии GSH с ДТНБК
(5,5’-дитио-бис-2-нитробензойной кислотой) с образованием окрашенного в
желтый цвет аниона 2-нитро-5-тиобензоата. Увеличение концентрации
желтого аниона в ходе данной реакции регистрировали
спектрофотометрически при длине волны 412 нм [Beutler, 1990].

Ход определения

Готовим гемолизат добавлением 0,2 мл отмытых от плазмы и упакованных
эритроцитов к 1,8 мл дист. Н2О, охлаждённой до 0єС. Для осаждения белков
к гемолизату добавляли 3 мл осаждающего раствора. Пробы тщательно
перемешивали и после 20 минутного стояния при комнатной температуре
фильтровали через крупнопористый фильтр. Фильтрат должен быть прозрачным
и бесцветным. 1 мл фильтрата помещали в спектрофотометрическую кювету
объёмом 3 мл, добавляли 4 мл фосфатного буфера. Затем в пробу вносили
500 мкл раствора ДТНБК. Сразу же после перемешивания должна появиться
жёлтая окраска из-за образования дисульфида глутатиона с ДТНБК. Пробу
фотометрировали при длине волны 412 нм в кювете с толщиной слоя 1,0 см.
Поскольку раствор ДТНБК имеет слабожелтую окраску, параллельно с опытной
пробой готовили контрольную, содержащую вместо фильтрата осаждающий
раствор, разведённый дист. Н2О в отношении 2:5.

Реактивы:

1. Осаждающий раствор: 1,67 г ледяной ортофосфорной кислоты, 0,2 г ЭДТА
и 30 г хлористого натрия растворяли в дист. Н2О и доводили до метки 100
мл.

2. Фосфатный буфер: 0,3 М Na2HPO4

3. ДТНБК: 0,02%-ный раствор, приготовленный на 1%-ном растворе цитрата
натрия

Содержание восстановленного глутатиона рассчитывали с учетом
коэффициента молярной экстинкции (13600 М-1см-1) окрашенного аниона,
образующегося при взаимодействии GSH с ДТНБК и выражали в мкмоль на
грамм Hb.

Содержание глутатиона рассчитывают по формуле:
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,

где:

С – концентрация восстановленного глутатиона, мкмоль/г Hb;

Е1 – оптическая плотность опытной пробы до добавления ДТНБК;

Е2 – оптическая плотность опытной пробы после добавления ДТНБК;

138 – разведение эритроцитов в реакционной пробе;

Hb – гемоглобин, г/л;

1000 – коэффициент для пересчета концентрации глутатиона от молярной к
миллимолярной;

F – отношение оптической плотности контрольной пробы до добавления ДТНБК
(Е1 ) и после добавления (Е2 );

13600 – коэффициент молярной экстинции окрашенного катиона,
образующегося при взаимодействии GSH с ДТНБК;

2.5. Определение активности глутатионпероксидазы

Принцип метода: глутатионпероксидаза катализирует реакцию взаимодействия
GSH с гидроперекисью трет-бутила (ГПТБ). Активность фермента при этом
может быть оценена по изменению содержания GSH в пробах до, и после
инкубации с модельным субстратом в ходе цветной реакции с ДТНБК [Paglia,
Valentine, 1967].

Ход определения

Отмытые и упакованные эритроциты гемолизировали охлаждённой до 0єС водой
в соотношении 1:200. 0,2 мл гемолизата смешивали с 0,73 мл сложного
буфера и термостатировали 10 мин при 37°С. Реакцию инициировали
внесением в реакционную смесь 0,07 мл 0,14%-ного раствора ГПТБ
(коммерческий препарат). Строго по секундомеру через 5 мин инкубации при
37°С реакцию останавливали добавлением 0,2 мл 20%-ного раствора ТХУ. В
контрольные пробы 0,14%-ный раствор ГПТБ вносили после осаждения белка
ТХУ. Полученные пробы центрифугировали при 1700g в течение 10 мин.
Супернатант использовали для определения количества восстановленного
глутатиона: к 0,1 мл супернатанта добавляли 2,65 мл 0,1 М трис-HCl
буфера. После перемешивания пробы фотометрировали на СФ-26 при длине
волны 412 нм в кювете с длиной оптического пути 1,0 см против дист. Н2О.
Активность фермента в эритроцитах выражали в мкмолях GSH, окисленного за
1 минуту на грамм Hb, используя коэффициент молярной экстинкции (13600
М-1см-1) окрашенного аниона, образующегося при взаимодействии GSH с
ДТНБК.

Реактивы:

1. Сложный буфер: 0,1М Трис-HCl-буфер, pH8,5, содержащий 6мМ ЭДТА и 12мМ
азид натрия. Непосредственно на этом буфере готовят 4,8 мМ раствор GSH

2. 0,14%-ный раствор трет-бутил гидропероксида

3. 20%-ный раствор ТХУ

4. 0,1 М трис-HCl буфер, pH8,5

5. ДТНБК на абсолютном метаноле, 0,01М

Активность рассчитывают по формуле:
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,

где:

А – активность фермента, мкмоль/минЧл;

?С – разность концентраций GSH в опытной и контрольной пробах;

Vпр. – объем пробы, используемый для определения концентрации GPO

t – время инкубации;

Vр.с..- объем реакционной смеси;

201 – степень разведения эритроцитов в гемолизате;

1000 – коэффициент для пересчета активности GPO от молярной к
миллимолярной;

Hb – гемоглобин г/л;

Активность GPO можно также выразить в мкмольмин на 1 г Hb

2.6. Определение активности глутатион-S-трансферазы

Принцип метода: активность глутатион-S-трансферазы определяли по
скорости образования глутатион-S-конъюгатов между GSH и
1-хлор-2,4-динитробензолом (ХДНБ).

Увеличение концентрации конъюгатов в ходе реакции регистрировали
спектрофотометрически при длине волны 340 нм (максимум поглощения
глутатион -S- ХДНБ) [Habig et al., 1974].

Ход определения

Источником фермента служил осмотический гемолизат, который готовили
добавлением к одному объему упакованных эритроцитов двадцати объемов
дист. Н2О, охлажденной до 0С. В кювету с длиной оптического пути 1,0 см,
содержащую 2,5 мл 0,1 М калий-фосфатного буфера рН=6,5, добавляли 0,2 мл
0,015 М раствора восстановленного глутатиона и 0,1 мл гемолизата.
Реакцию инициировали внесением в кювету 0,2 мл 0,015М ХДНБ (готовили на
абсолютном метаноле). Параллельно опытной готовили контрольную пробу, в
которую вместо гемолизата вносили дист. Н2О. Регистрацию оптической
плотности проводили при t=25C и длине волны 340 нм против воды сразу
после перемешивания в течение трех минут. Активность фермента
рассчитывали, используя коэффициент экстинкции для ГS-ХДНБ при длине
волны 340 нм, равный 9,6 мМ-1*см-1, и выражали в ммолях образующихся
глутатион S-конъюгатов в минуту на грамм Hb.

Реактивы:

1. 0.1М калий – фосфатный буфер РН6,5;

2. 0.015М раствор GSН;

3. 0.015М раствор ХДНБ.

Активность GPO рассчитывают по следующей формуле:
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где:

А – активность фермента, мольминЧHb

?E – изменение оптической плотности в мин.

d – толщена кюветы (1см)

f – коэффициент разведения эритроцитов в пробе

е – коэффициент молярной экстинкции при ч=340нм (9600М-1Чсм-1)

Hb – гемоглобин г/л

1000 – коэффициент для пересчета активности GST от молярной к
миллимолярной;

Vпр. – объем пробы, используемый для определения активности GST

Vр.с..- объем реакционной смеси;

2.7. Определение активности глутатионпероксидазы

Принцип метода: определение активности глутатионредуктазы основано на
измерении скорости окисления NADPH, которая регистрируется
спектрофотометрически по уменьшению оптической плотности при длине волны
340 нм .

Для определения активности глутатионредуктазы использовали осмотический
гемолизат, приготовленный следующим образом. К одному объему упакованных
и отмытых от плазмы эритроцитов добавляли девяти кратный объем холодной
дистиллированной воды.

Ход определения:

В спектрофотометрическую кювету с расстоянием между рабочими гранями 10
мм последовательно вносят 2,7 мл калий-фосфатного буфера, 0,1 мл
раствора NADPH, 0,1 мл гемолизата и 0,1 мл раствора GSSG. Реакция
запускается добавлением в пробу окисленного глутатиона. Смесь
перемешивают. Изменеие оптической плотности регистрируют через 1 минуту
в течение 3 минут против пробы, содержащей все компоненты, кроме GSSG.

Реактивы:

1. 50 мМ калий-фосфатный буфер , рН 7,0, содержащий 1мМ EDTA;

2. 0,1 мМ раствор NADPH;

3, 0,5 мМ раствор окисленного глутатиона (хранят в замороженном виде).

Активность фермента выражают в мкмолях г Hb в минуту. Расчет производят
по формуле:
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 ,

где:

А – активность глутатионредуктазы;

Е – изменение оптической плотности;

К – коэффициент, учитывающий разведение эритроцитов в реакционной пробе,
равный 300;

6,22 – коэффициент экстинкции для NADPH в см-1мМ-1, при длине волны 340
нм;

t – время наблюдения, мин;

d – расстояние между рабочими гранями кюветы (10 мм);

Hb – гемоглобин в гл.

2.8. Статистическая обработка результатов

В работе использованы стандартные статистические приемы подсчета,
медианы, определения 25 и 75 перцентеля с помощью пакета прикладных
программ Statistica 7.0. Достоверность полученных данных оценивали с
помощью непараметрического критерия Манна-Уитни, с достоверностью
Р

Нашли опечатку? Выделите и нажмите CTRL+Enter

Похожие документы
Обсуждение

Оставить комментарий

avatar
  Подписаться  
Уведомление о
Заказать реферат!
UkrReferat.com. Всі права захищені. 2000-2020