.

Цитология и строение клетки

Язык: русский
Формат: контрольна
Тип документа: Word Doc
0 1214
Скачать документ

ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНСТВО ПО ОБРАЗОВАНИЮ

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ

ВЫСШЕГО ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ

«ЧЕЛЯБИНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ ПЕДАГОГИЧЕСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ»

Е????? – ???????й ????т

???а ????

К????ая ???

? ????: «Ц???ия»

В??? № 6

Ц???ия и ???? ???

В????:

Г???? С???а В?????а

????а 3 ??а

2б ???

??. «???ия – ????? -????ия»

Н??? ??????:

Ч?я??к

2010

О????е

Вопрос 1 3

Вопрос 2 13

Вопрос 3 18

Список использованной литературы 21

В??с 1

Методы изучения клетки: микроспектромериз, цитофотометрия,
флуоресцентная и ультрафиолетовая микроскопия. Метод чисторадиографии

Методы микроскопии выбираются (и обеспечиваются конструктивно) в
зависимости от характера и свойств изучаемых объектов, так как последние
влияют на контрастность изображения.

Микроспектромериз

Метод светлого поля и его разновидности

Метод светлого поля в проходящем свете применяется при изучении
прозрачных препаратов с включенными в них абсорбирующими (поглощающими
свет) частицами и деталями. Это могут быть, например, тонкие окрашенные
срезы животных и растительных тканей, тонкие шлифы минералов и т. д.

В отсутствие препарата пучок света из конденсора, проходя через
объектив, даёт вблизи фокальной плоскости окуляра равномерно освещенное
поле. При наличии в препарате Абсорбирующего элемента происходит
частичное поглощение и частичное рассеивание падающего На него света,
что и обусловливает появление изображения.

Метод косого освещения – разновидность предыдущего метода. Отличие между
ними состоит в том, что свет на объект направляют под большим углом к
направлению наблюдения. Иногда это помогает выявить «рельефность»
объекта за счёт образования теней.

Метод светлого поля в отражённом свете применяется при исследовании
непрозрачных отражающих свет объектов, например шлифов металлов или руд.

Освещение препарата (от осветителя и полупрозрачного зеркала)
производится сверху, через объектив, который одновременно играет и роль
конденсора.

В изображении, создаваемом в плоскости объективом совместно с тубусной
линзой, структура препарата видна из-за различия в отражающей
способности её элементов; на светлом поле выделяются также
неоднородности, рассеивающие падающий на них свет.

Метод темного поля и его разновидности

Метод тёмного поля в проходящем свете используется для получения
изображений прозрачных неабсорбирующих объектов, которые не могут быть
видны, если применить метод светлого поля. Зачастую это биологические
объекты.

Свет от осветителя и зеркала направляется на препарат конденсором
специальной конструкции — т. н. конденсором тёмного поля. По выходе из
конденсора основная часть лучей света, не изменившая своего направления
при прохождении через прозрачный препарат, образует пучок в виде полого
конуса и не попадает в объектив (который находится внутри этого конуса).
Изображение в микроскопе формируется при помощи лишь небольшой части
лучей, рассеянных микрочастицами находящегося на предметном стекле
препарата внутрь конуса и прошедшими через объектив.

В поле зрения на тёмном фоне видны светлые изображения элементов
структуры препарата, отличающихся от окружающей среды показателем
преломления. У крупных частиц видны только светлые края, рассеивающие
лучи света.

Используя этот метод, нельзя определить по виду изображения, прозрачны
частицы или непрозрачны, больший или меньший показатель преломления они
имеют по сравнению с окружающей средой.

В основе метода ультрамикроскопии лежит тот же принцип – препараты в
ультрамикроскопах освещаются перпендикулярно направлению наблюдения. При
этом методе можно обнаружить (но не «наблюдать») чрезвычайно мелкие
частицы.

С помощью иммерсионных ультрамикроскопов удаётся зарегистрировать
присутствие в препарате частиц размером до 2*10-9 м. Но форму и точные
размеры таких частиц с помощью этого метода определить невозможно.
Непрозрачные препараты (например, шлифы металлов), наблюдаемые по методу
тёмного поля в отражённом свете освещают сверху — через специальную
кольцевую систему, расположенную вокруг объектива и называемую
эпиконденсором.

Цитофотометрия

Цитофотометрия – является современной технологией быстрого оптического
измерения параметров клетки, ее органелл и происходящих в ней процессов.

Методика заключается в выявлении рассеяния света лазерного луча при
прохождении через него клетки в струе жидкости, причём, степень световой
дисперсии позволяет получить представление о размерах и структуре
клетки. Кроме того, в ходе анализа учитывается уровень флуоресценции
химических соединений, входящих в состав клеточной стенки
(аутофлуоресценция) или внесённых в образец перед проведением
цитометрии.

Принцип метода. Клеточная суспензия, предварительно меченная
флюоресцирующими моноклональными антителами или флуоресцентными
красителями, попадает в поток жидкости, проходящий через проточную
ячейку.

Условия подобраны таким образом, что клетки выстраиваются друг за другом
за счет т. н. гидродинамического фокусирования струи в струе. В момент
пересечения клеткой лазерного луча детекторы фиксируют:

1. рассеяние света под малыми углами (от 1° до 10°) (данная
характеристика используется для определения размеров клеток).

2. рассеяние света под углом 90° (позволяет судить о соотношении
ядро/цитоплазма, а так же о неоднородности и гранулярности клеток).

3. интенсивность флуоресценции по 4-ем каналам флуоресцентности
(позволяет определить субпопуляционный состав клеточной суспензии и др.)

Наиболее часто используемые флуорохромы

– флуоресцеина изотиоцианат (FITC)

– Фикоэритрин (PE, RD1)

– Перидинин-Хлорофилл Протеин (Per-CP)

– Алофикоцианин (APC)

Тандемные красители:

– Фикоэритрин – Техасский красный (ECD)

– Фикоэритрин – Cy5 (PC5)

– Фикоэритрин – Cy7 (PC7)

Преимущества метода

– короткое время анализа (сек) за счет высокой скорости

– анализ большого количества клеток (до 107 клеток)

– логические ограничения допускают детектирование субпопуляций клеток

– измерение параметров редко встречающихся клеток

– объективное измерение интенсивности флуоресценции

Область применения в цитологии:

1. определение цитоморфологической принадлежности клетки размер,
соотношение ядро/цитоплазма, степень асимметричности и гранулярности
клеток

2. оценка активности внутриклеточных ферментов с помощью флуорогенных
субстратов

3. определение экспрессии поверхностных антигенов

4. анализ стадий клеточного цикла

5. измерение физиологических параметров клетки (внутриклеточный pH,
концентрация свободных ионов Ca2+, потенциал наружной клеточной
мембраны)

Флуоресцентная микроскопия

Флуоресцентная микроскопия – высокочувствительный микроскопический метод
(анализ проводится как в отраженном, так и в проходящем свете),
основанный на обработке тестируемого материала
красителями-флуорохромами. Флуоресцирующие (окрашенные) зоны выглядят
при флуоресцентной микроскопии как яркие участки на темном фоне.

Основана на способности некоторых веществ люминесцировать, т. е.
светиться при освещении невидимым ультрафиолетовым или синим светом.
Цвет люминесценции смещен в более длинноволновую часть спектра по
сравнению с возбуждающим ее светом (правило Стокса).

При возбуждении люминесценции синим светом цвет ее может быть от
зеленого до красного, если люминесценция возбуждается ультрафиолетовым
излучением, то свечение может быть в любой части видимого спектра.

Эта особенность люминесценции позволяет, используя специальные
светофильтры, поглощающие возбуждающий свет, наблюдать сравнительно
слабое люминесцентное свечение.

Устройство флуоресцентного микроскопа и правила работы с ним отличаются
от обычного светового микроскопа в основном следующим:

1. Наличие мощного источника света в осветителе, излучающего
преимущественно в коротковолновой (ультрафиолетовой, синей) части
спектра (ртутно-кварцевая лампа или галогенная кварцевая лампа).

2. Наличие системы светофильтров:

· возбуждающие светофильтры пропускают только ту часть спектра, которая
возбуждает люминесценцию;

· теплозащитный светофильтр защищает от перегрева другие светофильтры,
препарат и оптику флуоресцентного микроскопа;

· “запирающие” светофильтры расположены между окуляром. Эти светофильтры
поглощают возбуждающее излучение и пропускают свет люминесценции от
препарата к глазу наблюдателя.

Способ освещения препаратов для возбуждения люминесценции заключается в
том, что препарат освещают светом, падающим на него через объектив.
Благодаря этому освещенность увеличивается при использовании объектов,
имеющих большую числовую апертуру, т. е. тех, которые используются для
изучения микроорганизмов.

Важную роль при этом способе освещения играет специальная
интерференционная светоделительная пластинка, направляющая свет в
объектив. Она представляет собой полупрозрачное зеркало, которое
избирательно отражает и направляет в объектив часть спектра, которая
возбуждает люминесценцию, а пропускает в окуляр свет люминесценции.

Оптика объективов флуоресцентного микроскопа изготавливается из
нелюминесцирующих сортов оптического стекла и склеивается специальным
нелюминесцирующим клеем. При работе с объективами масляной иммерсии
используется нелюминесцирующее иммерсионное масло.

Поскольку большинство микроорганизмов не обладают собственной
люминесценцией существует несколько способов их обработки для наблюдения
в флуоресцентном микроскопе. Прежде всего, это флуорохромирование –
окрашивание сильно разведенными (до нескольких микрограмм/мл) растворами
флуоресцирующих красителей (флуорохромов). Флуоресцентная микроскопия по
сравнению с обычной позволяет:

– сочетать цветное изображение и контрастность объектов;

– изучать морфологию живых и мертвых клеток микроорганизмов в
питательных средах и тканях животных и растений;

– исследовать клеточные микроструктуры, избирательно поглощающие
различные флуорохромы, являющиеся при этом специфическими
цитохимическими индикаторами;

– определять функционально-морфологические изменения клеток;

– использовать флуорохромы при иммунологических реакциях и подсчете
бактерий в образцах с невысоким их содержанием.

Флюоресцентная (люминесцентная) микроскопия позволяет изучать как
собственную (первичную) флюоресценцию ряда веществ, так и вторичную
флюоресценцию, вызванную окрашиванием клеточных структур специальными
красителями — флюорохромами.

Принцип метода состоит в том, что некоторые вещества при световом
облучении начинают светиться сами. Для возбуждения флюоресценции в
видимой части спектра обычно пользуются синим светом или
ультрафиолетовыми лучами.

Многие вещества, не флюоресцирующие в видимой области (в особенности
нуклеиновые кислоты), при освещении ультрафиолетовыми лучами начинают
флюоресцировать и могут выявляться без применения флюорохромов.

К вторичной флюоресценции относится иммунофлюоресценция, основанная на
взаимодействии иммунного белка с флюорохромами.

Ультрафиолетовая микроскопия

Ультрафиолетовая микроскопия, основанная на способности некоторых
веществ избирательно поглощать ультрафиолетовые лучи с определенной
длиной волны, принципиально почти ничем не отличается от обычной
световой микроскопии и осуществляется при помощи микроскопов с кварцевой
или отражательной (зеркальной) оптикой. Изображение рассматривается на
флюоресцирующем экране визуально, а также фотографируется.

Микроскопирование объектов позволяет выявить исследуемые вещества, не
применяя окрашивания.

Поскольку крайний предел разрешения, достижимый с наилучшей линзой,
равен половине длины волны применяемого света, единственным возможным
путем увеличения разрешения может быть использование света более
коротких длин волн, чем видимый.

Таким светом является ультрафиолетовое излучение. Длина волны зеленого
света составляет 5000 А. Из соображений, обусловленных источниками света
и используемыми для линз материалами, самый коротковолновый реально
применимый на практике ультрафиолетовый свет — это мощное излучение
ртутной дуги, длина волны которого очень близка к 2500

А, т. е. как раз к половине длины волны зеленого света. В самом лучшем
случае использование этого ультрафиолетового света может только удвоить
разрешающую способность; достижение не такое уж значительное, тем не
менее достаточно желательное.

Однако существует иное и, может быть, большее основание пользоваться
ультрафиолетовым светом в микроскопии, оеобенно в применении к
биологическим объектам.

Было найдено, что различные участки образца могут (на самом деле это
совсемно редкий случай) поглощать ультрафиолетовый свет по-разному.
Вследствие этого прохождение света через объект может выявить совершенно
новые контрасты и обнаружить области различной структуры при условии,
что существует какое-нибудь устройство, позволяющее наблюдателю
«увидеть» ультрафиолетовое изображение.

В наше время ультрафиолетовые микроскопы изготовляются оптической
промышленностью.

При этом «приходится решать три задачи.

Необходимо создать безвредные для здоровья интенсивные источники
ультрафиолетового излучения, которые не излучали бы видимого света; в
противном случае видимый свет будет маскировать искомые эффекты.

В настоящее время этой цели служит ртутная дуга в кварцевой оболочке,
поскольку кварц прозрачен в требуемой области длин волн (обычное стекло
для такого света непрозрачно).

Источник помещается в контейнер из специального стекла, которое обладает
нужным свойством задерживать видимый свет, но пропускать значительную
часть ультрафиолета.

Метод чисторадиографии

Метод чисторадиографии основан на действии излучений, испускаемых
радиоизотопами, на фотопластинку. Он применяется как один из способов
качественного и количественного определения радиоактивности горных пород
и минералов.

Различают две разновидности метода: обычную, или контрастную,
радиографию и следовую, или микроавторадиографию. При обычной
радиографии изучаемый образец отшлифовывается, накладывается на эмульсию
фотопластинки, закрепляется на ней и экспонируется в темноте в течение
определенного времени, зависящего от активности образца.

Чем выше радиоактивность образца, тем интенсивнее (после проявления)
почернение фотопластинки. Такая радиография дает возможность решить
вопрос о распределении в образце радиоактивных элементов и оценить их
суммарное содержание путем сравнения с эталонным образцом. В контрастной
радиографии используется действие ?-, ?- и отчасти ?-излучения.

Способность сильно ионизирующих ?-частиц оставлять в проявленной
пластинке четкие прямолинейные следы (треки), видимые под микроскопом
примерно при 500-кратном увеличении, используется в
микроавторадиографии.

Для трековой авторадиографии используются специальные фотопластинки с
толстым слоем эмульсии (не менее 50 мкм) и большой концентрацией
бромистого серебра, не чувствительные к ?- и ?-излучению, но четко
фиксирующие ?-частицы различных энергий, а следовательно, различных
пробегов R. Определение пробегов необходимо для изучения природы
радиоактивности и раздельного измерения урана и тория.

В??с 2

Способы деления клеток. Сходства и различия митотического, редукционного
и эквационного деления клетки. Приведите примеры клеток, размножающихся
посредством указанных видов деления

Деление клеток – основа размножения и индивидуального развития
организмов. Жизненный цикл клетки. Митотический цикл клетки, митоз
(амитоз).

Жизнь клетки завершается делением или, как у многоклеточных организмов,
старением и смертью. Только благодаря способности воспроизводить себе
подобных осуществляется преемственность и непрерывность жизни на Земле.
В основе размножения и индивидуального развития организмов лежит
непрерывная серия клеточных делений.

Способы деления клеток представлены в схеме:
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Результат деления клетки – появление двух дочерних из одной материнской.
Этот процесс циклически повторяется, совершаясь через строго
определенное время. Разные виды клеток обладают разной скоростью и
способностью к делению.

Время существования клетки от деления к делению называют жизненным
циклом клетки.

Перед изучением этой темы повторите содержание понятий: ДНК, хромосомы,
хроматиды, клеточный центр, кариотип, гомологичные хромосомы,
постоянство числа хромосом.

Клеточный цикл эукариот состоит из интерфазы и мтоза. В период интерфазы
в клетке происходят следующие процессы:

1) удвоение хромосом – редупликация ДНК (удвоенная хромосома состоит из
двух хроматид, каждая из которых содержит одну молекулу ДНК).

2) биосинтез белков, накопление АТФ, Удвоение важнейших структур клетки.

Вслед за интерфазой наступает относительно короткий период в жизни
клетки при котором происходит равномерное распределение хромосом и
цитоплазмы по двум дочерним клеткам – МИТОЗ.

Митоз представляет собой сложное деление с образованием специального
аппарата для равномерного распределения хромосом по дочерним клеткам
(митотического веретена). В митозе условно можно выделить несколько
последовательных фаз: профаза, метафаза, анафаза, телофаза.

Биологическое значение митоза заключается в том, что он обеспечивает
постоянство числа хромосом во всех клетках организма. В процессе митоза
происходит распределение ДНК хромосом материнской клетки строго поровну
между возникающими из нее двумя дочерними клетками. В результате митоза
все клетки тела, кроме половых, получают одну и ту же генетическую
информацию. Такие клетки называются соматическими (от греч. “сома” –
тело).

Митотическое деление клеток (митоз) приводит к увеличению числа клеток,
росту организма. Таким способом обеспечивается обновление клеток при их
износе, гибели. В настоящее время известно, что клетки эпидермиса живут
10-30 дней, эритроциты – до 4-5 мес. Нервные и мышечные клетки (волокна)
живут в течение всей жизни человека. У всех клеток при размножении
(делении) наблюдаются изменения, укладывающиеся в рамки клеточного
цикла. Клеточным циклом называют процессы, которые происходят в клетке
от деления до деления или от деления до смерти (гибели) клетки. В
клеточном цикле выделяют подготовку клетки к делению (интерфаза) и митоз
(процесс деления клетки).

В интерфазе, которая длится примерно 20-30 ч, скорость биосинтетических
процессов возрастает, увеличивается количество органелл. В это время
удваивается масса клетки и всех ее структурных компонентов, в том числе
центриолей. Происходит репликация (повторение, удвоение) молекул
нуклеиновых кислот. Этот процесс передачи генетической информации,
хранящейся в родительской ДНК, путем точного ее воспроизведения в
дочерних клетках. Родительская цепь ДНК служит матрицей для синтеза
дочерних ДНК. В итоге репликации каждая из двух дочерних молекул ДНК
состоит из одной старой и одной новой цепей. В период подготовки к
митозу в клетке синтезируются белки, необходимые для деления клетки. К
концу интерфазы хроматин в ядре конденсирован.

Мейоз (или редукционное деление клетки) — деление ядра эукариотической
клетки с уменьшением числа хромосом в два раза. Происходит в два этапа
(редукционный и эквационный этапы мейоза). Мейоз не следует смешивать с
гаметогенезом — образованием специализированных половых клеток, или
гамет, из недифференцированных стволовых.

С уменьшением числа хромосом в результате мейоза в жизненном цикле
происходит переход от диплоидной фазы к гаплоидной. Восстановление
плоидности (переход от гаплоидной фазы к диплоидной) происходит в
результате полового процесса.

В связи с тем, что в профазе первого, редукционного, этапа происходит
попарное слияние (конъюгация) гомологичных хромосом, правильное
протекание мейоза возможно только в диплоидных клетках или в чётных
полиплоидах (тетра-, гексаплоидных и т. п. клетках). Мейоз может
происходить и в нечётных полиплоидах (три-, пентаплоидных и т. п.
клетках), но в них, из-за невозможности обеспечить попарное слияние
хромосом в профазе I, расхождение хромосом происходит с нарушениями,
которые ставят под угрозу жизнеспособность клетки или развивающегося из
неё многоклеточного гаплоидного организма.

Этот же механизм лежит в основе стерильности межвидовых гибридов.
Поскольку у межвидовых гибридов в ядре клеток сочетаются хромосомы
родителей, относящихся к различным видам, хромосомы обычно не могут
вступить в конъюгацию. Это приводит к нарушениям в расхождении хромосом
при мейозе и, в конечном счете, к нежизнеспособности половых клеток, или
гамет. Определенные ограничения на конъюгацию хромосом накладывают и
хромосомные мутации (масштабные делеции, дупликации, инверсии или
транслокации).

Второе деление мейоза (эквационное)

Второе мейотическое деление следует сразу же после первого и сходно с
обычным митозом. Второе деление мейоза состоит из тех же стадий, что и
митоз, с тем отличием, что в каждой клетке находится не диплоидное, а
гаплоидное число хромосом.

Второе деление мейоза проходит гораздо быстрее первого и обычно занимает
несколько часов. В целом же мейоз – значительно более длительный процесс
по сравнению с митозом: у ржи он идет более двух суток, у дрозофилы –
около недели, у человека – три с половиной недели.

Профаза II. Профаза II непродолжительна. При втором делении мейоза, в
профазе II, хромосомы спирализуются, ядерные мембраны исчезают, в каждой
клетке формируется веретено деления. Формула клеток №2с.

Метафаза II. В метафазе II хромосомы располагаются на экваторе. Как и во
время метафазы митоза, центромеры хромосом находятся на экваторе клетки,
а плечи хроматид направлены к полюсам. Формула клеток сохраняется (n2с).

Анафаза II. В анафазе II центромеры хромосом делятся, хроматиды
расходятся, происходит случайное комбинирование хроматид негомологичных
хромосом у полюсов (третий эффект мейоза), что также приводит к
появлению новых комбинаций неаллельных генов. Формула этих клеток 2n2с.

Телофаза II. В телофазе II хромосомы деспирализуются, образуются ядерные
мембраны, клетки делятся.

Таким образом, после второго деления мейоза из каждой гаплоидной клетки
с двойным набором хроматид (n2с) возникают две гаплоидные клетки с
одинарным набором хроматид (nc), отличные друг от друга по набору
генетического материала (генов).

Следовательно, клетки, образующиеся в результате мейоза, гаплоидны, и
содержат по одному гену из каждой аллельной пары (одинарный набор генов
диплоидного организма).

Биологический смысл мейоза состоит в том, что из одной диплоидной клетки
образуются четыре уникальные (по набору генов) гаплоидные клетки (не
похожие друг на друга и на материнскую клетку по набору генетического
материала). Гаплоидными клетки получаются потому, что деления (первое
деление мейоза и второе деление мейоза) происходит дважды, а синтез ДНК
– только один раз. Уникальность набора генов каждой клетки достигается
благодаря эффектам мейоза: кроссинговеру, независимому расхождению и
комбинированию негомологичных хромосом при первом делении, а также
независимому расхождению и комбинированию хроматид при втором делении.
Уменьшение числа хромосом в половых клетках в два раза (n) и
восстановление диплоидности (2n) при оплодотворении (слиянии половых
клеток) в зиготе способствует генетической стабильности вида.

В??с 3

Функции биологических мембран. Трансмембранный перенос малых молекул:
диффузия (пассивная и облегченная) и активный транспорт

Фосфолипидный бислой, как уже было сказано, составляет основу структуры
мембраны. Он также ограничивает проникновение полярных молекул и ионов в
клетку и выход их из нее. Ряд функций выполняют и другие компоненты
мембран.

1. Белки-каналы и белки-переносчики осуществляют избирательный транспорт
полярных молекул и ионов через мембрану (об активном транспорте и
облегченной диффузии смотрите соответствующие статьи).

2. Ферменты. Белки нередко функционируют как ферменты. В качестве
примера укажем на микроворсинки эпителия, выстилающего некоторые отделы
кишечника. Плазматические мембран этих эпителиальных клеток содержат
пищеварительные ферменты.

3. Рецепторные молекулы. У всех белковых молекул весьма специфическая
конформация, о чем мы уже говорили в наших статьях. Это делает их
идеальными рецепторами, т. е. молекулами, при помощи которых от клетки к
клетке передаются те или иные сигналы. Например, гормоны являющиеся
химическими посредниками, циркулируют в крови, но присоединяются они
только к особым клеткам-мишеням, у которых есть соответствующие
рецепторы. Нейромедиаторы — химические вещества, обеспечивающие
проведение нервных импульсов, — тоже связываются с особыми рецепторными
белками нервных клеток.

4. Антигены действуют как маркеры, своего рода «ярлыки», позволяющие
опознать клетку. Это гликопротеины, т. е. белки с присоединенными к ним
разветвленными олигосахаридными боковыми цепями, играющими роль
«антенн». Существует бесчисленное множество возможных конфигураций этих
боковых цепей, так что у каждой клетки может быть свой особый маркер. С
помощью маркеров клетки способны распознавать другие клетки и
действовать согласованно с ними, например при формировании тканей и
органов у многоклеточных организмов. Это же свойство позволяет иммунной
системе распознавать и атаковать чужеродные антигены.

5. У гликолипидов тоже имеются разветвленные олигосахаридные боковые
цепи и они также помогают клеткам распознавать друг друга. Гликолипиды
могут служить рецепторами для химических сигналов. Вместе с
гликопротеинами гликолипиды обеспечивают правильное сцепление клеток при
их объединении в ткани.

6. Перенос энергии. При фотосинтезе и дыхании в мембранах соответственно
хлоропластов и митохондрий действуют системы переноса энергии, в которых
также участвуют белки.

7. Холестерол служит дополнительным «стопором», препятствующим
перемещению полярных молекул через мембрану в обоих направлениях — в
клетку и из клетки.

Молекулы могут пассивно пересекать бислой по электрохимическому
градиенту путем простой или облегченной диффузии. Такому спонтанному
переносу, приводящему к установлению равновесия, противостоит активный
транспорт, который требует затрат энергии, поскольку он происходит
против электрохимического градиента.

Пассивный транспорт — перенос веществ по градиенту концентрации, без
затрат энергии (например, диффузия, осмос). Диффузия — пассивное
перемещение вещества из участка большей концентрации к участку меньшей
концентрации. Осмос — пассивное перемещение некоторых веществ через
полупроницаемую мембрану (обычно мелкие молекулы проходят, крупные не
проходят).

При простой диффузии частицы вещества перемещаются сквозь липидный
бислой. Направление простой диффузии определяется только разностью
концентраций вещества по обеим сторонам мембраны. Путём простой диффузии
в клетку проникают гидрофобные вещества (O2,N2,бензол) и полярные
маленькие молекулы (CO2, H2O, мочевина). Не проникают полярные
относительно крупные молекулы (аминокислоты, моносахариды), заряженные
частицы (ионы) и макромолекулы (ДНК, белки).

Большинство веществ переносится через мембрану с помощью погружённых в
неё транспортных белков (белков-переносчиков).

Все транспортные белки образуют непрерывный белковый проход через
мембрану.

С помощью белков-переносчиков осуществляется как пассивный , так и
активный транспорт веществ. Полярные вещества (аминокислоты,
моносахариды), заряженные частицы (ионы) проходят через мембраны с
помощью облегченной диффузии , при участии белков-каналов или
белков-переносчиков. Участие белков-переносчиков обеспечивает более
высокую скорость облегченной диффузии по сравнению с простой пассивной
диффузией . Скорость облегченной диффузии зависит от ряда причин: от
трансмембранного концентрационного градиента переносимого вещества, от
количества переносчика, который связывается с переносимым веществом, от
скорости связывания вещества переносчиком на одной поверхности мембраны
(например, на наружной), от скорости конформационных изменений в
молекуле переносчика, в результате которых вещество переносится через
мембрану и высвобождается на другой стороне мембраны. Облегченная
диффузия не требует специальных энергетических затрат за счет гидролиза
АТФ. Эта особенность отличает облегченную диффузию от активного
трансмембранного транспорта

С??к ??????? ?????

1. Биология. Общие закономерности. 9 класс (2003г.) “Дрофа”. С.Г.
Мамонтов, В.Б. Захаров, Н.И. Сонин.

2. Биология. Большой энциклопедический словарь / Гл.ред. М.С.
Гиляров.-3-е изд.-М.:1998.

3. Биология. Пособие для поступающих в вузы. (1984г.) “Высшая школа”
Э.В. Семенов, С.Г. Мамонтов, В.Л. Коган.

4. Биология. Введение в общую биологию и экологию. 9 класс. (2003г.).
“Дрофа” А.А. Каменский, Е.А. Криксунов.

5. Большой Энциклопедический словарь. — М.: Большая российская
энциклопедия, Просвещение, 1992. — 860 с.: ил. — ISBN 5-09-004171-7.

6. Мамонтов С.Г. Введение в цитологию . Учебник.-М.: Дрофа, 2004.

7. Найдыш В.М. Цитология: Учеб. Пособие.-М.: Гардарики, 2003.

8. Ченцов Ю.С. Общая цитология, 3-е изд. М., 1995 Грин Н., Стаут У.,
Тейлор Д. Биология, т. 1. М., 1996

Похожие документы
Обсуждение
    Заказать реферат
    UkrReferat.com. Всі права захищені. 2000-2019