Курсовая работа
на тему:
“Группа пневмовирусов”
СОДЕРЖАНИЕ
1. УНИКАЛЬНЫЕ ОСОБЕННОСТИ ПНЕВМОВИРУСОВ
1.1 ОБЩЕЕ ВВЕДЕНИЕ
1.2 НОМЕНКЛАТУРА
1.3 ВЫДЕЛЕНИЕ ВИРУСА
1.4 ХРАНЕНИЕ ВИРУСА
2. ОСНОВНЫЕ МЕТОДЫ
2.1 КУЛЬТИВИРОВАНИЕ РЕСПИРАТОРНО-СИНЦИТИАЛЬНОГО ВИРУСА
2.1.1 ЧУВСТВИТЕЛЬНЫЕ КУЛЬТУРЫ КЛЕТОК
2.1.2 ЦИТОПАТОГЕННОЕ ДЕЙСТВИЕ
2.1.3 МЕТОДЫ ПОВЫШЕНИЯ ИНФЕКЦИОННОЕ ™
2.1.4 МЕТОДЫ СТАБИЛИЗАЦИИ ИНФЕКЦИОННОЕ
2.2 МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ИНФЕКЦИОННОСТИ
2.3 ГЕМАГГЛЮТИНАЦИЯ
2.4 ГЕМАДСОРБЦИЯ
2.5 ИММУНОФЛУОРЕСЦЕНТНЫЕ МЕТОДЫ
2.6 ТВЕРДОФАЗНЫЙ ИММУНОФЕРМЕНТНЫЙ АНАЛИЗ
3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ
3.1 РАДИОАКТИВНОЕ ЛЕЧЕНИЕ, РАДИОИММУНОАНАЛИЗ И РАДИОИММУНОПРЕЦИПИТАЦИЯ
3.1.1 ВВЕДЕНИЕ РАДИОАКТИВНОЙ МЕТКИ В ВИРУСНЫЕ БЕЛКИ В ЗАРАЖЕННЫХ РСВ КЛЕТКАХ
3.1.2 РАДИОИММУНОАНАЛИЗ
3.1.3 РАДИОИММУНОПРЕЦИПИТАЦИЯ
3.2 МЕТОД ВЫЯВЛЕНИЯ ДЕФЕКТНЫХ ИНТЕРФЕРИРУЮЩИХ ЧАСТИЦ
3.3 ЭЛЕКТРОННАЯ МИКРОСКОПИЯ
3.3.1 МОРФОЛОГИЯ ВИРИОНОВ
3.3.2 МОРФОГЕНЕЗ ВИРИОНОВ
3.3.3 СКАНИРУЮЩАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ МИКРОСКОПИЯ
3.3.4 ЛОКАЛИЗАЦИЯ И КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ВИРУСНЫХ АНТИГЕНОВ ПО СВЯЗЫВАНИЮ СТАФИЛОКОККОВ
3.4 КОНЦЕНТРИРОВАНИЕ ВИРУСА
3.5 ОЧИСТКА И РАДИОАКТИВНОЕ МЕЧЕНИЕ РСВ
3.5.1 ГРАДИЕНТНОЕ ЦЕНТРИФУГИРОВАНИЕ
3.5.2 ОЧИСТКА РСВ МЕТОДОМ ИЗОПИКНИЧЕСКОГО ЦЕНТРИФУГИРОВАНИЯ
3.6 РАДИОАКТИВНОЕ МЕЧЕНИЕ ВИРИОННОЙ РНК
3.7 АНАЛИЗ ВИРУСНЫХ РНК И БЕЛКОВ МЕТОДОМ ЭЛЕКТРОФОРЕЗА В ПОЛИАКРИЛАМИДНОМ ГЕЛЕ
3.7.1 АНАЛИЗ БЕЛКОВ
3.7.2 АНАЛИЗ РНК
3.8 ОЧИСТКА МАТРИЧНОЙ РНК ДЛЯ ТРАНСЛЯЦИИ
3.9 МОЛЕКУЛЯРНОЕ КЛОНИРОВАНИЕ И ОЛИГОНУКЛЕОТИДНОЕ СЕКВЕНИРОВАНИЕ
3.10 ОЧИСТКА ВИРУСНЫХ БЕЛКОВ
3.10.1 ВИРУСНЫЕ ПОЛИПЕПТИДЫ
3.10.2 ОЧИСТКА КАПСИДНОГО БЕЛКА
3.10.3 ОЧИСТКА ВИРИОННЫХ ГЛИКОПРОТЕИНОВ
4. СПЕЦИАЛЬНЫЕ БИОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ
4.1 ПОЛУЧЕНИЕ МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ
4.2 ВЫДЕЛЕНИЕ ТЕМПЕРАТУРНО-ЧУВСТВИТЕЛЬНЫХ МУТАНТОВ
4.3 ПОЛУЧЕНИЕ ПЕРСИСТЕНТНО ИНФИЦИРОВАННЫХ КЛЕТОЧНЫХ КУЛЬТУР
1. УНИКАЛЬНЫЕ ОСОБЕННОСТИ ПНЕВМОВИРУСОВ
1.1 ОБЩЕЕ ВВЕДЕНИЕ
В состав группы пневмовирусов входят респираторно-синцитиальный вирус человека, респираторно-синцитиальный вирус крупного рогатого скота и вирус пневмонии мышей. Прототип этой группы, респираторно-синцитиальный вирус, – это плеоморфный оболочечный вирус, геном которого представлен несегментированной РНК негативной полярности. РСВ принадлежит роду Pneumovirus, который вместе с родами Paramyxovirus и Morbillivirus образует семейство Paramyxoviridae. Однозначно доказана этиологическая роль РСВ при ежегодных вспышках респираторных заболеваний у детей. Уникальность биологических, биохимических и клинических характеристик этого вируса не позволяет объединить его с представителями рода Paramyxovirus. РСВ обнаруживают у сельскохозяйственных животных; РСВ крупного рогатого скота вызывает у животных респираторное заболевание. Антитела к РСВ часто присутствуют и в сыворотке крови других домашних и лабораторных животных, контактирующих с человеком, но выделение вируса от этих животных не описано. Изоляты РСВ, выделенные от человека и крупного рогатого скота, имеют антигенное родство; среди человеческих изолятов не обнаружена связь между антигенной вариабельностью и клиникой заболеваний. Вирус пневмонии мышей, вызывающий у этих животных респираторное заболевание, не имеет антигенного родства с РСВ, однако в некоторой степени сходен с ним; во всяком случае это единственный вирус, достаточно близкий к РСВ, чтобы быть включенным в род Pneumovirus. Антитела к ВПМ с высокой частотой обнаруживаются в сыворотке крови человека; имеются неопубликованные данные, указывающие на то, что в лабораторные колонии мышей этот вирус попал от человека.
Основные свойства РСВ приведены в табл.1. РСВ отличается от других парамиксовирусов большим числом идентифицированных белков, порядком генов (имеются два гена неструктурных белков, один из которых расположен между З’-концевой лидерной последовательностью и геном нуклеопротеина, а другой – между гипотетическими генами гликопротеинов F и G), отсутствием гемагглютинина и нейраминидазы, а также характерными размерами нуклеокапсида и поверхностных выступов.
Таблица 1. Общие свойства пневмовирусов
Известные представители рода Нуклеиновая кислота Белки’>
Вирионные ферменты
Плавучая плотность частиц Морфология частиц
Морфология нуклеокапсида
Морфология мембранных выростов
Генетические взаимодействия
Стабильность
Круг хозяев Патогенность
Цитопатогенность РСВ человека
РСВ крупного рогатого скота
Вирус пневмонии мышей
Однонитевая несегментированная РНК с коэффициентом седиментации 50S; мол. масса >5 – 10е
2 гликопротеина оболочки: гликопротеин G мол. масса 90 кД и связанные между собой дисульфидными связями продукты расщепления гликопротеина F
2 негликозилированных белка оболочки: белок матрикса мол. масса 26 кД и белок с неизвестной функцией мол. масса 24 кД
3 белка сердцевины: гипотетическая полимераза, нуклеокапсидный белок и фосфопротеин
3 неструктурных белка неизвестной функции РНК-полимеразная активность Гемагглютинин Нейраминидазная активность отсутствует 1.15-1,26 г/см3
Плеоморфные частицы диаметром 80^ – 500 нм и нитевидные частицы диаметром 60-ПО нм и длиной до 5 мкм.
Спиральный тип симметрии, диаметр 12 – 13 нм
Длина 10-12 нм
8 групп комплементации
Рекомбинация или множественная реактивация не обнаружены
Термолабильны, нестабильны при рН
Нашли опечатку? Выделите и нажмите CTRL+Enter
