.

Антиоксидантная система при внутриутробной гипоксии плода

Язык: русский
Формат: дипломна
Тип документа: Word Doc
0 2022
Скачать документ

20

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Этиология, патогенез и клиника плацентарной недостаточности.

Хроническая внутриутробная гипоксия плода

Плацентарная недостаточность (ПН) – одна из важнейших проблем
акушерства, неонатологии и перинатологии. Она является причиной
внутриутробной гипоксии, задержки роста и развития плода, его травм в
процессе родов.

ПН приводит к увеличению перинатальной смертности, 20% случаев
перинатальной смертности непосредственно связаны с патологией плаценты.
ПН обуславливает высокую частоту соматической и инфекционной
заболеваемости новорожденных, служит причиной нарушений физического и
умственного развития ребенка.

В соответствии с основными положениями адаптационно-регуляторной теории
при развитии ПН на начальных этапах воздействия неблагоприятного фактора
прогрессирование заболевания характеризуется фазой устойчивой
гиперфункции. По мере истощения адаптационных механизмов – при
длительном влиянии неблагоприятных факторов – развивается фаза
декомпенсации [4, 5, 38].

Выделяют первичную и вторичную ПН.

Первичная ПН развивается в сроки формирования плаценты (до 16-ой недели
беременности) и с наибольшей частотой встречается у женщин, страдающих
привычным невынашиванием, а также у беременных с бесплодием в анамнезе.

Вторичная ПН, как правило, возникает после завершения процессов
формирования плаценты и обусловлена экзогенными влияниями, прежде всего
– перенесенными во время беременности заболеваниями. Течение как
первичной, так и вторичной ПН может быть острым и хроническим.

Доказано, что при физиологически протекающей беременности плацентарные
сосуды находятся в состоянии дилатации и не реагируют на сокращающие
стимулы. Это обстоятельство обеспечивает равномерное поступление
кислорода и питательных веществ к плоду. Рефрактерность сосудов плаценты
и системы кровообращения матери к вазопрессорам обеспечивается за счет
возрастающей продукции эндотелиальных факторов релаксации –
простациклина и оксида азота (II). Синергичное действие этих факторов
служит основным условием адаптации материнских сосудов к увеличению
нагрузки на кровоток, обеспечивает системную вазодилатацию и снижение
артериального давления по мере прогрессирования беременности [5, 7].

Патология плацентарного кровообращения развивается в тех случаях, когда
инвазивная способность трофобласта снижена или процесс инвазии
охватывает спиральные сосуды неравномерно. При этом в сформировавшихся
плацентарных сосудах частично сохраняется гладкомышечная структура,
адренергическая иннервация, и, следовательно – способность реагировать
на вазоактивные стимулы. Таким образом, участки плацентарных сосудов,
сохранившие эндотелиальные и гладкомышечные элементы, становятся мишенью
для действия медиаторов, циркулирующих в кровотоке. Структурные
изменения, происходящие в сосудах в ответ на их расслабление и
сокращение, лежат в основе нарушений плацентарного кровообращения [26].

Интенсивность маточно-плацентарного кровотока служит основным фактором,
определяющим поступление кислорода к плоду. При недостаточном снабжении
плацентарной ткани оксигенированной кровью в трофобласте нарушается
течение метаболических процессов. В условиях, когда кровь, омывающая
межворсинковое пространство, недостаточно насыщена кислородом,
трофобласт компенсирует собственные метаболические потребности за счет
увеличения площади капиллярной сети плодовой части плаценты. Если
способность плаценты к развитию коллатерального кровообращения не
удовлетворяет полностью потребностям плода, то в недостаточно
кровоснабжаемых участках плацентарной ткани развиваются выраженные
нарушения микроциркуляции и локальные ишемические изменения. При
повреждении 1/3 маточно-плацентарных сосудов компенсаторные возможности
плодовой части плаценты обычно не могут полностью обеспечить
возрастающие энергетические потребности растущего плода. Нарушается
плацентарная перфузия, создаются условия для отставания темпов роста и
развития плода [4, 5, 7].

Недостаточное поступление кислорода в межворсинковое пространство
оказывает повреждающее воздействие на эндотелий сосудов ворсинчатого
трофобласта, где индуцируются процессы свободнорадикального окисления.
Усиленная васкуляризация фетоплацентарной ткани, которая происходит в
условиях недостаточного поступления кислорода и дефицита продукции
эндотелиальных факторов релаксации под влиянием кислородных свободных
радикалов приводит к истощению энергетических резервов клеток и
нарушению структуры сосудов. По мере истощения запасов АТФ, сосудистые
клетки реализуют свои энергетические потребности за счет процессов
анаэробного гликолиза. Эндогенные источники энергии (АДФ, аденозин)
нуждаются в усиленном притоке Са2+ в цитозоль клеток из внутриклеточных
депо. Увеличение концентрации Са2+ в цитозоле клеток приводит к
высвобождению мощнейшего эндогенного вазоконстриктора – эндотелина.
Увеличение продукции О2- в эндотелии происходит в период перехода от
ишемии к реперфузии, провоцирует высвобождение эндотелина и вазоспазм
[9].

Таким образом, недостаточное кровоснабжение трофобласта служит основным
фактором, приводящим к нарушению регуляции кровообращения в плаценте.
Перепадам давления в плацентарных сосудах вследствие ишемии-реперфузии
принадлежит центральная роль в патогенезе ишемических повреждений
плацентарной ткани и жизненно важных органов плода.

К факторам риска развития ПН относят влияние природных и
социально-экономических условий, стрессовых ситуаций, тяжелых физических
нагрузок, употребление алкоголя, курение, различные токсикомании,
возраст, конституциональные особенности будущей матери,
экстрагенитальные заболевания, отягощенный репродуктивный и
акушерско-гинекологический анамнез, особенности течения данной
беременности.

Основной причиной гипоксии плода и рождения детей с нарушением мозгового
кровообращения является ПН. Поэтому выбор оптимальных сроков и способа
родоразрешения женщин с данной патологией позволяет существенно снизить
перинатальные потери [4, 7, 13].

Хроническая внутриутробная гипоксия плода (ХВГП), нарушение
маточно-плацентарного и плодово-плацентарного кровотока, показателей
биофизического профиля плода служат причиной снижения
компенсаторно-приспособительных реакций плода и развития тяжелых
перинатальных повреждений мозга в процессе родов. Нарушения
функциональных связей в системе мать-плацента-плод, характерные для ПН,
способствуют развитию патологии сократительной деятельности матки в
родах (патологического прелиминарного периода, несвоевременного излития
околоплодных вод, слабости и дискоординированной родовой деятельности).
Быстрый и стремительный темп родов также неблагоприятен для плода,
развивающегося в условиях длительной гипоксии. Поэтому при составлении
плана ведения родов важно иметь, по-возможности, более полную информацию
о состоянии плацентарного кровотока и способности плода к компенсаторным
реакциям [36].

ХВГП обусловлена уменьшением или прекращением поступления в организм
кислорода.

В патогенезе ХВГП основным фактором является фетоплацентарная
недостаточность при акушерской и экстрагенитальной патологии. Нарушения
структуры плаценты и процессов микроциркуляции в ней при поздних
гестозах беременности, анемиях, экстрагенитальных заболеваниях приводят
к хроническому кислородному голоданию плода. В результате происходит
нарушение функции сердечно-сосудистой и центральной нервной систем,
регуляции гомеостаза, снижение иммунологической реактивности организма
плода [1, 4, 5, 13].

Гипоксические состояния связаны с изменениями в сложной системе
мать-плацента-плод. Это свидетельствует о том, что исход беременности
для плода и во многом для матери зависит от состояния
компенсаторно-приспособительных механизмов фетоплацентарного комплекса и
рациональной коррекции выявленных нарушений.

Основные проявления гипоксии плода: нарушение частоты сердечных
сокращений, ухудшение звучности сердечных тонов; появление аритмии,
снижение интенсивности движения плода, изменение показателей
кислотно-основного равновесия. Последствиями перинатальной гипоксии
могут быть различные патологические состояния организма ребенка:
кардиопатии, пороки сердца, детский церебральный паралич и др. [4, 5, 7,
13].

1.2. Гормоны плаценты при физиологически протекающей беременности и при
хронической внутриутробной гипоксии плода

Фетоплацентарный комплекс играет важную роль в развитии и поддержании
беременности и синтезирует ряд местных и гуморальных регуляторов, в том
числе и гормональной природы. К гормонам беременности относятся:
стероидные гормоны (прогестерон, эстрогены, кортизол), хорионический
гонадотропин (ХГЧ), плацентарный лактоген (ПЛ), хорионический
тиреотропный гормон (ХТТГ), хорионический адренокортикотропный гормон
(ХАКТГ), релаксин, пролактин, кортикотропин-рилизинг-фактор
(кортиколиберин, КТРФ), гонадотропин-рилизинг-гормон (ГТ-Рг),
тиреотропин-рилизинг-фактор (тиролиберин), соматостатин,
альфа-меланоцитстимулирующий гормон (?-МСГ), бета-липотропин, эндорфины,
энкефалины и т.д.

Прогестерон (ПГ) – стероидный гормон желтого тела яичников и плаценты,
необходимый для всех стадий беременности.

ПГ образуется в яичниках и в небольшом количестве в коре надпочечников
под влиянием лютеотропного гормона. Метаболизируется большей частью в
печени. Во время беременности синтез ПГ стимулируется ХГЧ. В 1 триместре
беременности образование ПГ происходит в организме матери; со 2
триместра первые этапы синтеза происходят в организме матери, дальнейшие
этапы осуществляются плацентой. ПГ подготавливает эндометрий матки к
имплантации оплодотворенной яйцеклетки, а затем способствует сохранению
беременности: подавляет активность гладкой мускулатуры матки,
поддерживает в центральной нервной системе доминанту беременности;
стимулирует развитие концевых секреторных отделов молочных желез и рост
матки, синтез стероидных гормонов; оказывает иммунодепрессивное
действие, подавляя реакцию отторжения плодного яйца. Для проявления ПГ
своего физиологического эффекта в женском организме требуется
предварительное воздействие эстрогенов. Главным органом-мишенью ПГ
является матка. Гормон вызывает секреторную трансформацию
пролиферативно-утолщенного эндометрия, тем самым обеспечивая его
готовность к имплантации оплодотворенной яйцеклетки. Вне беременности
секреция ПГ начинает возрастать в предовуляторном периоде, достигая
максимума в середине лютеиновой фазы. Прогестерон вызывает стимуляцию
теплового центра и повышение температуры на 0,50С после овуляции в
лютеиновую фазу менструального цикла. Концентрация его возвращается к
исходному уровню в конце цикла. Данное резкое падение концентрации ПГ
вызывает менструальное кровотечение. Определение уровня ПГ используют
для оценки адекватности лютеальной фазы и контроля эффективности
овуляции. Содержание ПГ в крови беременной женщины увеличивается,
повышаясь в 2 раза к 7-8 неделе, а затем более плавно возрастает к
37-38-й неделям [8, 20, 32].

Еще один важнейший гормон, который наряду с ПГ, оказывает приоритетное
влияние на деятельность женской половой системы – эстроген.

Эти стероидные гормоны вырабатываются фолликулярным аппаратом женщин. В
небольшом количестве гормон вырабатывается корой надпочечников, но его
количества незначительны в сравнении с долей, производимой яичниками.
Продукция их находится в прямой зависимости от состояния
маточно-плацентарного кровообращения и наличия предшественников,
вырабатываемых в организме матери и плода.

У женщин в физиологических концентрациях эстрогены вызывают рост
и дифференцировку клеток эпителия влагалища, способствуют развитию
вторичных половых признаков, подготавливают репродуктивную систему
к беременности, обеспечивают вход яйцеклетки в половые пути
и возможность ее оплодотворения после овуляции. Сохранение рН среды
влагалища, ритмические сокращения матки, развитие молочных желез,
распределение подкожного жира, характерное для женского типа, появление
либидо – все эти эффекты обеспечивают в том числе и эстрогены. Они же
способствуют регулярному отторжению эндометрия и регулярным
кровотечениям.

Эстрогены «работают» в паре с ПГ, в противовес друг другу. Нарушение
этого равновесия приводит к ряду тяжелейших заболеваний. Эстрогены
в высокой концентрации вызывают гиперплазию эндометрия
и его кистозно-железистое перерождение [20, 32, 48].

Кроме стероидных гормонов в крови матери находятся также пептидные
гормоны. Они, попадая в кровь матери и плода, вызывают изменения в
метаболизме, иммунных процессах, участвуют в регуляции маточно- и
фетоплацентарного кровотока.

Для развития беременности важен плацентарный гормон – хорионический
гонадотропин. ХГЧ представляет собой гликопротеин, синтезируемый
клетками синцитиотрофобласта плаценты. ХГЧ является
гликопротеином-димером. Состоит из двух субъединиц: альфа и бета.
Альфа-субъединица идентична с альфа-субъединицами гормонов гипофиза:
тиреотропным гормоном (ТТГ), фолликулстимулирующим гормоном (ФСГ) и
лютеинизирующим гормоном (ЛГ). Концентрация бета-ХГЧ в моче достигает
диагностического уровня на 1-2 дня позже, чем в сыворотке крови.

В первом триместре беременности ХГЧ обеспечивает синтез ПГ и эстрогенов,
необходимых для поддержания беременности, желтым телом яичника. ХГЧ
действует на желтое тело подобно лютеинизирующему гормону, т.е.
поддерживает его существование. Это происходит до тех пор, пока комплекс
плод-плацента не приобретет способность самостоятельно формировать
необходимый гормональный фон. Действуя на плаценту, ХГЧ стимулирует
выработку эстриола и прогестерона. У плода мужского пола ХГЧ стимулирует
клетки Лейдига, синтезирующие тестостерон, необходимый для формирования
половых органов по мужскому типу.Синтез ХГЧ осуществляется клетками
трофобласта, после имплантации эмбриона (с 6-8 дня после оплодотворения
яйцеклетки) и продолжается в течение всей беременности. При нормальном
течении беременности, в первые недели содержание бета-ХГЧ удваивается
каждые 2 дня. Пик концентрации ХГЧ приходится на 10-11 неделю
беременности, затем его концентрация начинает медленно снижаться. При
многоплодной беременности содержание ХГЧ увеличивается пропорционально
числу плодов. Пониженные концентрации ХГЧ могут говорить об эктопической
беременности или угрожающем аборте.

Пролактин (Прл) известен как важный полифункциональный гормон гипофиза,
большинство биологических эффектов которого связано с репродуктивной
функцией.

Прл, в основном, синтезируется в гипофизе и после ряда событий
посттрансляционного процессинга секретируется лактотрофами передней доли
гипофиза. По структуре и биологическим свойствам пролактин имеет общие
черты с гипофизарным гормоном роста (соматотропином), плацентарным
лактогеном и пролиферином и объединен с ними в отдельное семейство –
семейство пролактинподобных белков.

Известно, что опиоидные пептиды и, в особенности, продукт процессинга
проопиомеланокортина (ПОМК) – бета-эндорфин входят в число факторов,
стимулирующих синтез препролактина – предшественника пролактина. С
другой стороны имеются данные, что еще один продукт процессинга ПОМК –
альфа-МСГ ингибирует секрецию Прл.

Большинство биологических эффектов пролактина связано с репродуктивной
функцией: он вызывает лактацию у млекопитающих, пролиферацию зобной
железы у птиц, поддерживает активность желтого тела и продукцию
прогестерона, действует на рост и дифференцировку тканей. Кроме этого
пролактин влияет на водносолевой обмен, обладает анаболическим
действием, вызывает ряд поведенческих реакций у млекопитающих,
земноводных и птиц.

В большом количестве при участии надпочечников и печени плода
фетоплацентарный комплекс продуцирует кортизол (Кр). Кр –
глюкокортикоид, синтезируемый в коре надпочечников. Секреция кортизола
подчиняется суточному ритму: у детей в отсутствие стресса концентрация
кортизола в сыворотке в 8:00 составляет обычно 11± 2,5мкг%, а в 23:00 –
3,5 ± 0,15 мкг%. Суточный ритм секреции кортизола устанавливается к
концу первого года жизни, поэтому у грудных детей он проявляется не
столь четко. Этот гормон играет важную роль в развитии альвеолярного
эпителия и секреции сурфактанта, которые помогают расправлению легких
при первом вздохе ребенка [8, 13].

Плацентарный кортикотропин-рилизинг-фактор вырабатывается трофобластом,
хорионом, амнионом и децидуальной тканью и обнаружен в крови плода.
Кроме того он синтезируется также гипофизом. Инкубация плацентарной
ткани человека с КТРФ приводит к дозозависимой секреции ?эндорфина и
меланоцитстимулирующего гормона. Рецепторы КТРФ были обнаружены в
миометрии, где КТРФ оказывает констрикторный эффект, действуя синергично
с окситоцином. КТРФ стимулирует также синтез NO эндотелием сосудов
плаценты, что приводит к дилатации этих сосудов и улучшению
фетоплацентарного кровообращения [8].

Таким образом, вырабатываемый во время беременности плацентарный КТРФ
участвует в развитии гиперкортицизма у матери, обеспечении адекватного
кровоснабжения плода (возможно, за счет активации NO-синтазы в стенке
сосудов фетоплацентарной системы) и затем, непосредственно перед родами,
в усилении сократимости матки.

Таким образом, гормонопродуцирующая функция плаценты определяет
физиологические процессы в системе мать-плацента-плод. Однако, кроме
участия в развитии и поддержании беременности плацентарные гормоны могут
быть вовлечены в патогенез нарушений состояния фетоплацентарного
комплекса.

1.3. Ферменты плаценты при физиологическом течении беременности и при
хронической внутриутробной гипоксии плода

В снабжении плода питательными веществами и продуктами обмена важную
роль играют ферменты плаценты, которые локализуются в основном
внутриклеточно. Среди них следует выделить группу дыхательных ферментов:
оксидазы, каталаза, НАД – и НАДФ-диафоразы, дегидрогеназы (ДГ).

К ферментам плаценты, участвующим в углеводном обмене, относят диастазу,
инвертазу, лактазу, карбоксилазу, кокарбоксилазу и др. Активность их в
плаценте в 4-8 раз выше, чем в печени матери, и повышается по мере
развития беременности и увеличения потребностей плода [16,28].

В плацентарном цито- и синцитиотрофобласте обнаружена аминопептидаза А
(АП А, ангиотензиназа). Фермент осуществляет превращение ангиотензина II
в ангиотензин III. По мере развития беременности в сыворотке крови
матери наблюдается повышение активности АП А. Предполагается участие
ангиотензиназы в снижении прессорного ответа сосудов на ангиотензин II
при ХВГП [28].

Важную роль в поддержании и развитии беременности играет
цистинаминопептидаза (ЦАП), наибольшая активность которой обнаружена в
лизосомальной фракции плацентарной ткани. Предполагается ее участие в
деградации ангиотензина II, благодаря чему ЦАП может вовлекаться в
поддержание кровяного давления у матери на нормальном уровне в течение
беременности [11].

В регуляцию иммуных процессов во время беременности вовлечена
плацентарная аминопептидаза N (АП N). Она участвует в деградации
иммуномодулирующих пептидов. Кроме того, АП N гидролизует энкефалины,
соматостатин, нейрокинин А, а также лиз-брадикинин, ангиотензин III [8].

Таким образом, большинство аминопептидаз участвует в обмене вазоактивных
пептидов. Вероятно, эти ферменты препятствуют сужению плацентарных
сосудов и вовлекаются в перераспределение фето-плацентарного кровотока
при ХВГП.

В микроворсинках плацентарного синцитиотрофобласта в большом количестве
содержится ангиотензинпревращающий фермент – компонент
ренин-ангиотензиновой системы (РАС). Фермент катализирует превращение
ангиотензина I в ангиотензин II, участвует в деградации брадикинина.
Показано, что в норме содержание фермента в плазме крови беременных
постоянно нарастает к III триместру [16].

Также в микроворсинках плаценты человека обнаружена карбоксипептидаза N.
Фермент, являясь компонентом калликреин-кининовой системы (ККС), главным
образом контролирует циркуляцию крови в фетоплацентарном комплексе,
участвует в деградации брадикинина в плаценте и сыворотке крови.
Обнаружено, что уровни брадикинина в артериальной и венозной крови
сосудов пуповины ниже, чем в крови матери [38].

Многообразные функции в плацентарной ткани выполняют пептидгидролазы.
Определенную роль в развитии беременности, особенно в ранние сроки, в
период имплантации плодного яйца, играют катепсины, активность которых
прогрессивно снижается в процессе развития беременности, особенно при
перенашивании.

Таким образом, при осложнениях беременности отмечаются изменения в
функционировании ферментных систем плаценты, в том числе тех, которые
участвуют в образовании и инактивации пептидов, регулирующих кровоток в
ФПК. Последние, в свою очередь, могут быть вовлечены в развитие
многочисленных адаптационных реакций. Поэтому представляется важным
исследование активности ферментов обмена биологических активных пептидов
при патологиях беременности.

1.3.1. Катепсины

Катепсины – (от греч. kathepso-перевариваю), ферменты класса гидролаз,
катализирующие гидролиз пептидной связи. Содержатся в тканях животных и
человека. Неспецифический протеолиз играет важную роль в регуляции
белкового обмена, в ходе которого белки организма постоянно обновляются.

По строению активного центра различают три основных группы катепсинов. В
группу катепсинов, содержащих в активном центре остаток серина (так
называемые сериновые амидгидролазы), входят катепсин А (сериновая
карбоксипептидаза A1)и катепсин G. Обширную группу составляют катепсины,
содержащие в активном центре цистеин (тиоловые амидгидролазы). В эту
группу входят катепсины В, С, Н, L, N и S. К катепсинам, содержащим в
активном центре остаток аспарагиновой кислоты (так называемые
карбоксильные амидгидролазы), относятся катепсин D и катепсин Е.
Катепсин С обладает также сильно выраженной транспептидазной активностью
– катализирует перенос олигопептидов на пептиды или аминокислоты.
Известен также катепсин F, который катализирует расщепление
протеогликанов. Он ингибируется некоторыми иммуноглобулинами, не
чувствителен к действию диизопропилфторфосфата, пепстатина и реагентов,
взаимодействующих с группой SH [16, 38].

Во время беременности наблюдается активация протеолиза. В I триместре
повышение протеолитической активности может быть связано с происходящими
в этот период процессами имплантации и плацентации. II триместр
характеризуется завершением периода формирования плаценты и вступлением
ее в фазу активного функционирования, что обеспечивает иммуносупрессию.
В III триместре увеличение активности ингибиторного звена
протеолитической системы может быть связано с нарастанием потенциала
свертывания крови, гиперкоагуляцией. Перед родами активация протеолиза
связана с повышением фибринолитической активности трофобласта. После
родов наблюдается усиление активности ингибиторов протеаз, что может
быть расценено как защитная компенсаторная реакция [16].

Катепсин D – важнейшая лизосомальная протеиназа, отражающая способность
клеток к ращеплению белков и играющая важную роль в процессе
внутриклеточного протеолиза.

Катепсин D существует в виде множественных форм с pI от 5,8 до 7,2 [14,
16]. Максимальная активность отмечена при pH 2,8-4,0.

При гель-фильтрации установлена Mr 42000, а при аналитическом
ультрацентрифугировании – 43300. В плаценте протеиназа локализована в
ворсинах синцитиотрофобласта.

Катепсин D – эндопептидаза, гидролизующая пептидные связи, образованные
остатками гидрофобных аминокислот, один из которых – ароматический.
Лучшим субстратом является гемоглобин. Фермент раcщепляет многие
природные субстраты: вещество Р, соматостатин, пролактин , -липотропин,
-эндорфин.

Катепсин D участвует в регуляции развития клетки и ее программируемой
гибели, что связано с процессами в системе протеолиз-антипротеолиз, в
которой происходит нарушение баланса при ХВГП. Поэтому представляет
интерес изучение активности катепсина D при патологическом течении
беременности.

1.4. Перекисное окисление липидов и антиоксидантная система
фетоплацентарного комплекса при физиологической беременности и
хронической внутриутробной гипоксии плода

При физиологической беременности скорость инициированного окисления
липидов повышается примерно в 3 раза. Во время беременности в связи с
возрастанием основного обмена и увеличением потребления кислорода в
крови происходит ряд значительных биохимических изменений: повышается
концентрация нейтрального жира, холестерина и липидов [3]. Также
увеличивается активность фосфолипазы А2. В результате ее действия в
крови увеличивается концентрация ненасыщенных жирных кислот, которые
являются непосредственным субстратом для перекисного окисления [15].
Нарушения в системе перекисного окисления липидов (ПОЛ) и
антиоксидантной активности (АОА) являются одним из механизмов
формирования антиоксидантной недостаточности вследствие чрезмерного
усиления ПОЛ. В результате активации ПОЛ и накопления свободных
радикалов происходит нарушение структурно-функциональной целостности
клеточных мембран, освобождение лизосомальных ферментов, что в конечном
итоге приводит к патологическим процессам в клетке и организме в целом
[2, 3, 33]. В настоящее время можно считать в основном расшифрованными
механизмы альтерации и реакцию клеточных мембран на повреждение. В
конечном итоге они обусловлены свободно-радикальной агрессией и
процессами перекисного окисления липидов и белков – важнейших
компонентов клеточной стенки [4]. Активатором перекисного окисления
служат свободнорадикальные формы кислорода. Субстратом ПОЛ являются
полиненасыщенные жирные кислоты (ПНЖК). Дефицит ПНЖК нарушает барьерную
и матричную функции клеточных мембран. Об этом свидетельствует повышение
параметра упорядоченности липидного бислоя мембраны (микровязкости
мембран) [37]. Одновременно с этим отмечено выраженное уменьшение
гидрофобности мембран, а, следовательно, увеличение гидрофилии липидного
бислоя, и как следствие – его повышенную проницаемость. Нарушение
барьерной функции липидного бислоя мембран сопряжено с изменением
функционирования каналов для ионов, в первую очередь Са2+, а также –
Na+, K+, Mg2+. Массивный вход Са2+ в клетку приводит к необратимым
изменениям в ней, в частности к энергетическому голоду и ее гибели, с
одной стороны, а с другой – дополнительно к мышечной контрактуре и
вазоспазму. Диеновые коньюгаты, являющиеся первичным продуктом
перекисного окисления, увеличивают полярность гидрофобных углеводородных
хвостов жирных кислот, которые образуют липидный бислой мембраны. При
физиологическом процессе регуляции клеточной активности участки
углеводородных хвостов, полярность которых возросла, вытесняются из
глубоких слоев мембраны к поверхности, что облегчает процесс
самообновления мембраны и влияет на ее проницаемость и ионный транспорт.
При избыточном появлении свободнорадикальных форм кислорода
самоускоряющееся ПОЛ приводит к полному разрушению ненасыщенных липидов,
нарушению структуры и функции белков и других молекул и, как следствие,
к гибели клетки [3, 15].

Одним из основных способов неспецифической защиты жизнеспособности
органов и тканей является активность антиоксидантных систем,
обеспечивающих устойчивость живых клеток к свободнорадикальному
повреждению [15, 24]. Исследования последних лет подтвердили, что у
женщин с ХВГП напряженность оксидантного стресса, регистрируемая по
динамике плазменного уровня общей оксидантной активности, концентрации
перекисных липидов и малонового диальдегида (МДА), прогрессивно
нарастает к концу 3-го триместра беременности [3, 5, 33].

В АО различают ферментативные (оксидоредуктазные ферменты и
антиперекисные ферменты) и неферментативные (низкомолекулярные тиолы,
аскорбиновая кислота, токоферол, витамины А, К, Р, убихинон и др.)
звенья. Защита структурных биологических мембран осуществляется
преимущественно липидными биоантиоксидантами. Активность
антиоксидантного фермента глутатионпероксидазы в эритроцитах существенно
не изменена как при физиологической беременности, так и при риске
невынашивания в обоих критических сроках. Активность
глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы в ранних сроках беременности повышается
значительно. Одновременно уровень токоферола и ретинола снижается в
плазме и повышается в плацентарной ткани. [33]. Важными ферментами АОС
являются каталаза и церулоплазмин. Церулоплазмин (ЦП) — медьсодержащая
оксидаза, относится к альфа-2-глобулиновой фракции плазмы крови
человека. Особый интерес вызывают антиоксидантные, иммунорегулирующие,
радиопротективные свойства. Благодаря своей высокой ферроксидазной
активности ЦП предотвращает неферментативные реакции, дающие начало
свободным радикалам и дальнейшему развитию ПОЛ. При физиологических
условиях ЦП крови ингибирует ПОЛ на 50%. Подавление ПОЛ достигается за
счет перехвата и инактивации супероксидного ион-радикала О2 * [3, 5].

Выявлено увеличение концентрации ЦП у беременных в сравнении с их
значениями у небеременных [27, 34]. По-видимому, данный факт объясняется
активацией системы ПОЛ при беременности, приводящей в свою очередь к
активации антиоксидантной системы защиты организма. Кроме того, выявлено
достоверное снижение активности ЦП при ХВГП и гестозах, что может быть
объяснено истощением антиоксидантной системы защиты организма в условиях
ее напряженного функционирования, вызванного развитием тяжелых
осложнений беременности [27, 29, 34, 44].

Каталаза — фермент класса оксидоредуктаз, катализирующий разложение
перекиси водорода на воду и молекулярный кислород. При низкой
концентрации перекиси каталаза проявляет также пероксидазную активность,
окисляя низшие спирты, полифенолы. Одной из основных функций каталазы
является защита клеточных мембран от пероксида водорода, образующегося
при перекисном окислении липидов [29].

Таким образом, при патологически протекающей беременности наблюдается
дисбаланс в системе ПОЛ-АОС. При активации свободно-радикальных
процессов на фоне снижения антиоксидантной активности риску повышенной
окислительной модификации подвергаются не только липиды, но и белки. В
связи с этим вызывает интерес изучение показателей перекисного окисления
липидов и антиоксидантной системы в плаценте при ХВГП.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Материалы исследования

Активность катепсина D, содержание пептидов средней молекулярной массы,
активность каталазы, церулоплазмина, уровень продуктов перекисного
окисления липидов (диеновых и триеновых коньюгатов), уровень
гидроперекисей определяли в плацентарной ткани, которую получили сразу
после родов. Для исследования брали наиболее удаленную от места
прикрепления пуповины ткань. Плацентарную ткань помещали в охлажденный
физиологический раствор, очищали от крови и высушивали фильтровальной
бумагой. Ткани взвешивали, навески гомогенизировали в стеклянном
гомогенизаторе с тефлоновым пестиком.

2.1.1. Клинические группы

Было обследовано 16 образцов плацентарной ткани женщин в возрасте от 20
до 40 лет.

Все родильницы были разделены на 2 группы (рис. 1). Первая группа –
женщины с физиологическим течением беременности и родов (n =8), вторая
группа – женщины с хронической внутриутробной гипоксией плода (n=8).

Клинические группы
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20

норма ХВГП

Рис. 1. Клинические группы

2.2. Методы исследования

2.2.1. Метод определения активности катепсина D

Для определения активности катепсина D использовали 7,5%-ый гомогенат
ткани на натрий-ацетатном буфере (рН 3,3). Препарат фермента (20 мкл)
смешивали с 60 мкл 100 мМ натрий-ацетатного буфера (рН 3,3) и
преинкубировали 8 мин при температуре 37°С. Начинали реакцию
прибавлением в опытные пробы 20 мкл 8% раствора гемоглобина, полученного
из бычьей крови. Реакцию останавливали через 40 мин прибавлением 100 мкл
5% раствора трихлоруксусной кислоты. В контрольные пробы добавляли 20
мкл 8% раствора гемоглобина. Пробы центрифугировали 30 мин при 4000
об/мин. После центрифугирования отбирали 100 мкл надосадочной жидкости и
определяли количество образовавшегося тирозина методом Лоури. Пробы
колориметрировали на КФК-2 при л=750 нм. Активность фермента определяли
как разность в оптической плотности между опытными и контрольными
пробами. Активность фермента выражали в нмоль тир, образовавшегося за 1
мин инкубации в пересчете на 1 мг белка. Количество белка в пробах
определяли методом Лоури.

2.2.2. Метод определения количества пептидов средней
молекулярной массы

Для определения количества пептидов средней молекулярной массы
использовали 5%-ый гомогенат ткани. Белки исследуемой биологической
жидкости осаждали равным объемом 0,6 М раствора хлорной кислоты. Осадок
отделяли центрифугированием при 3000 об/мин в течение 30 мин.
Надосадочную жидкость нейтрализовали 3М раствором К2СО3 из расчета 0,2
мл на 1 мл супернатанта. Осадок отделяли центрифугированием при 3000
об/мин в течение 30 мин. Нейтрализованный супернатант разводили в 5 раз.
После центрифугирования отбирали 0,5 мл нейтрализованного разведенного
супернатанта, в котором определяли количество пептидов средней
молекулярной массы методом Лоури. Содержание пептидов средней
молекулярной массы выражали в мкг/мл.

2.2.3. Метод определения активности каталазы

Активность каталазы выражается каталазным числом – количеством мг
перекиси водорода, которое может разложить 1 мкг крови (гомогената).

В две колбы наливали по 7 мл дистиллированной воды и добавляли в них по
1 мл гомогената. Содержимое контрольной пробы кипятили 2 – 3 мин. В обе
колбы вносили по 2 мл 1% раствора H2O2 и инкубировали 30 мин при
комнатной температуре. Затем приливали по 5 мл 10% H2SO4 и оттитровывали
содержимое колб 0,05н раствором KMnO4 до розового цвета.

Расчет: 1мл 0,05 н KMnO4 соответствует 0,85 г H2O2. Таким образом,
разницу в результатах титрования контроля и опыта умножаем на эту
величину и получаем количество мг перекиси водорода, которое может
разложить 1 мкл гомогената.

2.2.4. Метод определения активности церулоплазмина

Активность церулоплазмина определяли модифицированным методом Ревина,
который базируется на окислении p-фенилендиамина при участии этого
фермента. Ферментативную реакцию останавливают добавлением фтористого
натрия. По оптической плотности образующихся продуктов судят о
концентрации церулоплазмина.

В пробирки вносили по 0,1 мл гомогената. В контрольную пробу добавляли
2 мл раствора NaF (с целью инактивации ферментативной активности
церулоплазмина). Затем в контроль и опыт добавляли по 8 мл ацетатного
буфера и по 1 мл р-фенилендиамина (используемого в качестве субстрата).
Пробирки встряхивали и инкубировали 1 час при температуре, равной +370С.

После инкубации во все пробирки, за исключением контрольной, доливали по
2 мл раствора фтористого натрия. Содержимое пробирок перемешивали и
переносили в холодильник, где выдерживали в течение 30 минут при +40С.

Пробы колориметрировали на КФК-2 при л=530 нм. Результаты сравнивали с
данными контрольной пробы. Значение оптической плотности умножали на
коэффициент пересчета 875.

2.2.5. Метод определения содержания продуктов перекисного окисления
липидов (диеновых и триеновых коньюгатов)

Для экстракции липидов брали 1 мл 25% гомогената плацентарной ткани,
приливали 3 мл метанола, перемешивали стеклянной палочкой, встряхивали в
течение 15 минут, затем центрифугировали при 3000 об/мин в течение 5
минут. Добавляли 3 мл гексана, вновь тщательно перемешивали стеклянной
палочкой, встряхивали в течение 15 минут и оставляли отстаиваться на 30
минут.

После разделения слоев, верхний (метанол – гексановый слой) отбирали в
сухую пробирку и использовали для исследований.

Уровень диеновых конъюгатов определяли спектрофотометрически при длине
волны 233 нм, кетодиенов и сопряженных триенов – 278 нм, ненасыщенных
липидов – 220 нм. Рассчитывали содержанимое диеновых конъюгатов,
кетодиенов и сопряженных триенов по отношению к уровню ненасыщенных
липидов (E233/E220 и Е278/Е220).

2.2.6. Метод определения содержания гидроперекисей

Для приготовления гомогената использовали буфер 0,025 н трис-HCl (pH
7,4), содержащий 0,175 м KCl. В центрифужные пробирки помещали по 2 мл
25% гомогената и осаждали белки добавлением 0,2 мл 50% раствора ТХУ.

Образовавшийся осадок отделяли центрифугированием в течении 10 минут
при 4000 об/мин. Далее 2 мл надосадочной жидкости доводили 96% этанолом
до 27 мл, прибавляли 0,2 мл концентрированной соляной кислоты и 0,025 мл
5%-го раствора соли Мора в 3%-ной HCl, пробы интенсивно встряхивали.
Через 30 секунд приливали 1 мл 20%-го раствора роданистого калия, после
чего развивается малиновая окраска. В качестве контроля использовали
пробы, содержащие 96%-ный этанол вместо надосадочной жидкости. Измерение
оптической плотности проводили в течение 10 минут после добавления
роданистого калия при л=480 нм.

2.2.7. Статистическая обработка результатов исследования

Достоверность отличий между средними определяли с использованием
t-критерия Стьюдента. Корреляционный анализ проводили с помощью
программы Статистика (версия 6.0).

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. Активность катепсина D в плацентарной ткани в норме и при
хронической внутриутробной гипоксии плода

Результаты исследования показали достоверное повышение активности
катепсина D плацентарной ткани при хронической внутриутробной гипоксии
плода. Отмечено повышение активности фермента при патологии в 1,8 раз по
сравнению с нормой (рис.2).
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Рис.2. Активность катепсина D в плаценте в норме и при хронической
внутриутробной гипоксии плода (нмоль продукта, образовавшегося за 1 мин
инкубации на 1 мг белка; * – р

Нашли опечатку? Выделите и нажмите CTRL+Enter

Похожие документы
Обсуждение

Оставить комментарий

avatar
  Подписаться  
Уведомление о
Заказать реферат!
UkrReferat.com. Всі права захищені. 2000-2020