.

Антиатеросклеротическое действие смеси масел льна и расторопши с селенопираном

Язык: русский
Формат: дипломна
Тип документа: Word Doc
0 1981
Скачать документ

36

ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО ПО ОБРАЗОВАНИЮ

Пензенский государственный педагогический университет

имени В.Г. Белинского

Факультет Кафедра

Естественно-географический Биохимии

ДИПЛОМНАЯ РАБОТА НА ТЕМУ:

Антиатеросклеротическое действие смеси масел льна и расторопши с
селенопираном

Студент________________________________________Краснова Ю.В.

Руководитель___________________________________Петрушова О. П.

________________Кравченко Ю. В.

К защите допустить. Протокол № от «_____» ____________2007 г.

Зав. Кафедрой______________________________________Генгин М. Т.

Пенза, 2007 год

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

АО – антиоксиданты

АКМ – активные кислородные метаболиты

АС – атеросклероз

БОТ – бутилокситолуол

ВЖР – высокожировой рацион

ГМК – гладкомышечные клетки

ДК – диеновые коньюгаты

ИА – индекс атерогенности

ЛНП – липопротеиды низкой плотности

ЛОНП – липопротеиды очень низкой плотности

ЛП – липопротеиды

ЛВП – липопротеиды высокой плотности

мГМК – модифицированные ГМК

МДА – малоновый диальдегид

мЛНП – модифицированные ЛНП

ПНЖК – полиненасыщенные жирные кислоты

ПОЛ – перекисное окисление липидов

СМЛР – смеси масел льна и расторопши с селенопираном

СП – селенопиран

ТГ – триглицеридов

ТФ – токоферол

ХС – холестерин

ХС- ЛВП – холестерин липопротеидов высокой плотности

ХС- ЛНП – холестерин липопротеидов низкой плотности

ХС- ЛОНП – холестерин липопротеидов очень низкой плотности

ХСобщ – общий холестерин

ЭХС – эфиры холестерина

ВВЕДЕНИЕ

В настоящее время в диетотерапии и профилактике различных заболеваний,
особенно сердечно-сосудистой системы, широко используются
полиненасыщенные жирные кислоты (ПНЖК) семейства Омега-3. В
многочисленных клинических и экспериментальных исследованиях выявлен
положительный эффект применения данных жирных кислот, связанный с их
влиянием на липидный обмен, иммунологическую реактивность и механизмы
свертывания крови. Большинство подобных исследований [26, 27, 31]
посвящено изучению эффективности ПНЖК, входящих в состав рыбных жиров.
Растительным жирам в этом смысле уделено гораздо меньше внимания, хотя
традиционным в России сырьем для получения масла, богатого
альфа-линоленовой кислотой (семейства Омега-3), является семя льна.
Комбинируя масло семян льна с другими растительными маслами, можно
добиться оптимального соотношения ПНЖК класса Омега-3 и Омега-6,
рекомендованного для целей диетотерапии. Существенным недостатком
пищевого масла, богатого ПНЖК, является низкий срок хранения из-за
высокой способности этих жирных кислот к окислению, поэтому актуальным
является поиск способа стабилизации продукта. Второй аспект проблемы
заключается в биологической целесообразности употребления такого масла.
Известно, что в условиях недостатка в организме антиоксидантов
поступление в него ПНЖК может приводить к индукции перекисного окисления
липидов [36]. Решением этих вопросов может служить введение в
композицию масла расторопши пятнистой с комплексом флаволигнанов [10] и
синтетического антиоксиданта (АО). В качестве жирорастворимого АО в
данной работе исследовалось органическое соединение селена –
9-фенил-симметричный октагидроселеноксантен (селенопиран – СП). Обладая
высокой водородо- и электронодонорной активностью, данное соединение
препятствует образованию перекисей [3]. Кроме того, СП в живом
организме подвергается метаболизации в системе микросомального окисления
[4], после чего из него высвобождается атом селена, встраивающийся в
селенопротеины, основной функцией которых является антиоксидантная
защита.

Целью нашей работы было исследование антиоксидантных свойств
селенопирана in vitro, а также изучение антиатеросклеротического
действия смеси масел льна и расторопши, стабилизированной селенопираном
при моделировании экспериментального атеросклероза.

При выполнении работы были поставлены следующие задачи:

Исследовать количество липидов плазмы крови и их соотношение.

1. Изучить влияние смеси масел льна и расторопши, стабилизированной
селенопираном, на процессы перекисного окисления липидов.

2. Выявить влияние смеси масел льна и расторопши, стабилизированной
селенопираном, на процесс атерогенеза.

Научная новизна. Впервые выявлено антиатеросклеротическое действие смеси
масел льна и расторопши, стабилизированной селенопираном in vivo при
моделировании экспериментального атеросклероза. Выявлены различия
действия исследуемого масла в клетках (эритроцитах, печени) и плазме
крови.

Апробация работы. Материалы работы доложены на Научной студенческой
конференции ПГПУ им. В.Г. Белинского.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Атеросклероз (АС) – патологическое изменение внутреннего слоя (интимы) и
мышечного слоя (медии) артерии. Слово образовано от греч. «атере» –
кашица, основной компонент которой – эфиры холестерина (ЭХС), включенные
в уплотненную склерозированную бляшку [2]. Клиническими проявлениями АС
являются различные широко распространенные сосудистые заболевания разных
органов: сердца, аорты, головного мозга, почек, нижних конечностей.
Атеросклеротическая бляшка затрудняет кровоток и вызывает ишемию и
гипоксию органа, а при полной закупорке сосуда бляшкой или
индуцированным ею тромбом возникают грозные осложнения АС: инфаркт
миокарда, инсульт, гангрена конечностей [2].

1.1.Биохимические ОСНОВЫ ПАТОГЕНЕЗА АТЕРОСКЛЕРОЗА

По мере накопления экспериментальных данных по атеросклерозу, возникли
разные гипотезы об этиологии заболевания и патогенезе. Все гипотезы
связаны с транспортом липопротеидов (ЛП) и холестерина (ХС) в сосудистую
стенку. Повышенный уровень ХС является, бесспорно, главным
патогенетическим фактором развития атеросклероза, существенную роль
играют и другие факторы риска: факторы повреждения эндотелия (инфекции,
воспаления, гипертония, токсические факторы, например никотин, высокие
содержания липопротеинов низкой плотности (ЛНП) и липопротеинов очень
низкой плотности (ЛОНП), повышенная свертываемость крови,
гемодинамические факторы (бляшки возникают в местах изгибов, ветвления,
стенозов сосудов) и изменение содержания гормонов, но, пожалуй,
важнейшим фактором можно назвать химическую и физико-химическую
модификацию ЛНП (гликозилирование, перикисное окисление ХС и ПНЖК в ЛНП,
десиалирование, частичный протеолиз, агрегация) [2].

В состав атеросклеротических бляшек входят: ЭХС, триацилглицерины,
гликозаминогликаны, коллаген, эластин, кальций, макрофаги,
модифицированные гладкомышечные клетки (мГМК), погибшие клетки. В
атеросклеротических бляшках с большой частотой обнаруживаются ДНК
герпесвирусов (цитомегаловируса и простого герпеса), а также хламидии.
Роль этих микроорганизмов остается пока невыясненной. При разрыве
фиброзной капсулы под действием механических и токсических факторов
обнажается холестериновая кашица, и такая злокачественная бляшка
становится центром агрегации тромбоцитов, отложения сгустков фибрина и
тромбообразования [2].

Учитывая все перечисленные этиологические и патогенетические факторы,
можно привести пример механизма интегральной модели АС артериальной
стенки. В норме ЛНП крови транспортируют в эндотелий и другие клетки
сосуда ХС, необходимый им для формирования мембран. При
гиперхолестеринемии, обусловленной повышенным уровнем ЛНП, или при
модификации ЛНП, главный поток ХС, во внутреннюю стенку сосудов,
осуществляют моноциты. Последние фагоцитируют ЛНП, модифицированные ЛНП
(мЛНП), аутоиммунные комплексы мЛНП с антителами и переносят ХС в
субэндотелиальный участок интимы. ЛНП разрушаются в эндолизосоме,
освобождая ХС, который накапливается в цитозоле макрофагов в виде капель
ЭХС, придавая клеткам пенистый вид («пенистые» клетки). Этерификацию ХС
катализирует ацетил-коэнзим А-холестеринацилтрансфераза, активируемая
свободным ХС. «Пенистые» клетки, погибая освобождают ХС в межклеточное
пространство для формирования бляшек [2].

Источником ХС бляшек так же служат гладкомышечные клетки (ГМК).
Активированные макрофаги продуцируют в интиме цитокины (интерлейкин – 1
и др.), которые стимулируют миграцию ГМК из медии сосуда в интиму, а так
же их пролиферацию и трансформацию в ГМК синтезирующего типа («миома
сосуда»). Последние продуцируют коллаген и другие структуры
соединительной ткани фиброзной бляшки. мГМК также фагоцитируют ЛНП и
мЛНП, превращаясь в «пенистые » клетки [2].

Около 70% ХС крови содержится в составе ЛНП. Уровень ХС в крови зависит
от огромного количества факторов: поглощаемой пищи, синтеза и регуляции,
транспорта, расходования на синтез жирных кислот и других соединений с
выведением. При патологических процессах нарушается динамическое
равновесие между указанными факторами, что может привести к
гиперхолестеринемии. Следовательно, гиперхолестеринемия – главный фактор
риска развития атеросклероза, как правило, связана с увеличением
содержания в крови ЛНП и их предшественников ЛОНП – двух атерогенных ЛП.
Поэтому более строгим фактором риска следует считать не
гиперхолестеринемию, а дислипопротеинемию – количественное преобладание
ЛНП, ЛОНП и качественные изменения в структуре ЛНП (мЛНП) [2]. В
формировании модифицированных липопротеидов центральную роль играют
процессы свободнорадикального окисления (перекисное окисление липидов
(ПОЛ)).

1.2. ПЕРЕКИСНОЕ ОКИСЛЕНИЕ ЛИПИДОВ

Из всех классов ЛП ПОЛ затрагивает в первую очередь именно ЛНП [14].
ПОЛ в частицах ЛНП – сложный многоступенчатый и еще не до конца
выясненный процесс. Постоянно возникающие в животном организме свободные
радикалы О-2, HO*2 и НО- генерируют образование гидроперекисей
ненасыщенных жирных кислот, входящих в состав фосфолипидов,
триглицеридов (ТГ) и ЭХС ЛНП [14].

ПОЛ – цепная свободнорадикальная реакция. На первых стадиях 92-98 % всех
продуктов окисления составляют гидроперекиси, образованию которых
предшествует гидроперекисный радикал ROO* (образуется в акте
одноэлектронного окисления с появлением сопряженных двойных связей)
[Камышников В.С., 2000]. Преобразование липидов в гидроперекиси жирных
кислот (ацилгидроперекиси – первичные продукты ПОЛ) приводит к
образованию «пор» в мембранах, через которые наружу выходит содержимое
клетки и органелл. Первичные продукты ПОЛ неустойчивы и разрушаются.
Вторичные продукты ПОЛ: альдегиды, кетоны, спирты и эпоксиды. Продукты
ПОЛ способствуют агрегации тромбоцитов, уменьшению синтеза
простагландинов, антикоагулянтному действию и разрушению мембран [12].

Трудно точно назвать место, где образуются перекисно-модифицированные
ЛНП. По-видимому, значительная часть их образуется в крови в результате
окисления липидов в этих комплексах при участии клеток белой крови,
генерирующих активные кислородные радикалы. Поскольку гранулоцитарные
лейкоциты не проникают в интиму артерий, есть основания полагать, что их
участие в окислении ЛНП происходит не в артериальной стенке, а именно в
кровотоке. Другая потенциальная возможность перекисной модификации
частиц возникает в процессе циркуляции в кровяном русле в результате
контакта ЛП с клетками эндотелия. Аналогичной способностью
модифицировать ЛНП обладают и другие клетки: ГМК, активированные
моноциты и лейкоциты и даже фибробласты. Речь идет, следовательно, о
перекисной модификации ЛП, индуцированной клетками [14]. .В образовании
мЛНП участвуют так же ферменты, объединенные общим названием
липоксигеназы. Нельзя исключить и то, что процесс пероксидации ЛНП может
продолжаться и в самой интиме вследствие контакта с другими клетками
(макрофагами и др.) и недостатка в интиме АО [14].

Таким образом, множество данных указывает на то, что реакции
свободнорадикального окисления липидов являются необходимым атрибутом
процесса атерогенеза.

1.3. АТЕРОГЕНЕЗ

Многие исследователи отмечают, что необходимым условием атерогенеза
является повреждение стенки сосуда, что приводит к секвестрации и
накоплению в интиме фагоцитирующих клеток с последующим их перерождением
в «пенистые» клетки. Тот факт, что формирование «пенистых» клеток
происходит при инкубации макрофагов только с окисленными или
модифицированными («атерогенные ЛНП»), но не с нативными ЛНП, послужил
основой концепции, согласно которой, начальным этапом атерогенеза
является возникновение окисленных ЛНП, цитотоксичных для эндотелиоцитов
и усиливающих адгезию нейтрофилов, что вызывает повреждение эндотелия;
захват окисленных ЛНП макрофагами и приводит к образованию «пенистых»
клеток, их накоплению в интиме сосудов и в последующем – к формированию
атеросклеротической бляшки [20, 33, 37, 38]. Таким образом,
свободнорадикальные реакции с участием активированных кислородных
метаболитов (АКМ) являются атерогенным фактором, так как вызывают
модификацию ЛП (преимущественно ЛНП) плазмы крови; кроме того АКМ и
продукты их реакции, в том числе и окисленные ЛП, оказывают
цитотоксическое и деструктивное воздействие на клетки и ткани [23, 29],
что может лежать в основе повреждения сосудов [16]. Множество
экспериментальных, клинических и эпидемиологических исследований
позволяют отнести АС к классическим свободно радикальным патологиям [1,
6].

В моноцитах (макрофагах) и в эндотелии сосудов основную роль в
поглощении окисленных ЛНП играют не ЛНП-рецепторы, а особые
нерегулируемые скэвенджер-рецепторы, (рецепторы – «мусорщики») для
модифицированных ЛНП [21]. Общим признаком всех лигандов для скэвенджер
– рецепторов является наличие полианионных комплексов
(«рецептор-липучка»). Скэвенджер – рецепторы связывают только
модифицированные ЛНП, и их экспрессия не регулируется внутриклеточным
содержанием холестерина [21]. Больше всего скэвенджер – рецепторов
выявляется в моноцитах/ макрофагах [34].

Проникновению моноцитов в эндотелиальную стенку предшествует их адгезия
на поверхности эндотелия, по-видимому, в ответ на появление в интиме
мЛНП и секрецию хемотаксических веществ – хемоатрактантов. Адгезивные
молекулы обеспечивают прилипание моноцитов на поверхности эндотелия.
Часть проникших в интиму моноцитов/макрофагов подвергается в ней
пролиферации [35].

Значительная часть макрофагов после захвата ими мЛНП и накопления в них
ЭХС трансформируется в «пенистые» клетки и остается в интиме.
Подавляющая часть «пенистых» клеток гибнет, при этом в интиму изливаются
накопленные в них ЭХС, ненасыщенных эфиров холестерина и кристаллы
моногидрата ХС. Образуются очаговые скопления ХС и создается угроза
развития сначала липидных пятен, а затем и атеросклеротических бляшек
[13].

Оценивая участие макрофагов в атерогенезе, следует сказать, что эти
клетки, захватывая мЛНП, стремятся выжить и покинуть артериальную стенку
вместе с захваченными ЛП. Об этом свидете6льствует активация
пролиферации макрофагов в интиме при появлении в ней мЛНП и миграция
макрофагов из интимы в кровяное русло еще до превращения в «пенистые»
клетки. Есть и другие пути избавления стенки сосуда от ХС [13]:

– гидроксилирование ХС и превращение его в более растворимые
производные, которые клетка секретирует в окружающую среду.

– усиленный синтез макрофагами аполипопротеина Е и фосфолипидов с
последующим образованием дискоидальных комплексов, способных связывать и
удалять ХС из клетки.

– гидролиз ЭХС и удаление ненасыщенных эфиров холестерина при участии
ЛВП.

– уменьшить содержание ХС и ЛНП в крови могут такие гормоны, как
иодтиронины и эстрогены. Иодтиронины индуцируют на уровне транскрибции
образование ЛНП-рецепторов и 7-гидроксилазы печени – регуляторного
фермента синтеза желчных кислот из ХС. Эстрогены ингибируют образование
последнего фермента, но активируют синтез ЛНП-рецепторов и
ГМГ-СоА-редуктазы печени (регуляторный фермент синтеза ХС) [2].

Одним из важных защитных механизмов можно считать действие различных АО,
которые являются ингибиторами образования мЛНП.

1.4. АНТИОКСИДАНТЫ В ЖИВОМ ОРГАНИЗМЕ

В живом организме функционирует внутренняя система антиоксидантной
защиты, представленная ферментами (глутатионпероксидаза,
супероксиддисмутаза, каталаза и глутатионредуктаза) и низкомолекулярными
соединениями (тиоловые соединения, мочевая кислота, некоторые пептиды).
Помимо этого, многие низкомолекулярные соединения, образующиеся в
организме или поступающие с пищей (водорастворимые или жирорастворимые),
способны служить в качестве компонентов антиоксидантной защиты клеток,
внутри- и межклеточной жидкости (аскорбиновая кислота, мочевая кислота,
токоферол, флавоноиды, каротиноиды, и др.). Неферментные АО-
низкомолекулярные соединения, перехватчики радикалов и активных
кислородных метаболитов. Общим признаком очень многих АО является их
способность выступать в качестве донора протона функциональной группы.
По строению функциональной группы важнейшие для человека и млекопитающих
низкомолекулярные АО можно разделить на соединения, содержащие SH-группы
(тиоловые АО) и ОН- группы (фенольные АО) [15].

Тиоловые соединения

В свете современных данных становится все более очевидной ведущая роль
тиоловых соединений в механизме антиоксидантной защиты. К такому
заключению приводят несколько обстоятельств [19]. К примеру, основная
часть функциональных компонентов антиоксидантной системы представлена
веществами тиоловой природы. Так, в состав неферментного звена входят
низкомолекулярные тиолы (глутатион, тиоредоксин и др.) и тиол содержащие
белки, которые по некоторым данным [32] даже более реактивны по
отношению к АКМ, чем глутатион. К тиоловым компонентам сыворотки крови
млекопитающих относятся альбумины, представляющие собой важные
внеклеточные АО [28]. Ферменты, принимающие участие в
противоокислительной защите, либо относятся к собственному числу
тиоловых энзимов, либо нуждаются в присутствии тиолов для проявления
каталитической активности. Во-вторых, уникальные химические свойства
тиолов наделяют их высокой антиокислительной способностью [15].

Фенольные соединения, имеющие в своей структуре ароматическое кольцо с
несколькими ОН-группами, также являются мощными перехватчиками
радикалов, эффективность которых возрастает в зависимости от количества
гидроксильных заместителей цикле [15].

Важную роль в защите клеток, и главным образом, их мембран от
окислительных повреждений играют токоферолы (ТФ), антиокислительное
действие которых реализуется двумя путями. Во-первых, ТФ способны
стабилизировать мембраны за счет хорошей растворимости в фосфолипидах и
взаимодействия их с жирнокислыми цепями, что увеличивает плотность
упаковки фосфолипидов в мембране и снижает вероятность их окисления.
Вторым проявлением антиоксидантных свойств токоферолов является их
способность перехватывать АКМ и ингибировать ПОЛ, в результате чего
образуются малоактивные токоферильные радикалы, которые легко
восстанавливаются аскорбиновой кислотой, убихиноном или мочевой
кислотой, что обеспечивает регенерацию витамина Е [11, 22].

Одним из наиболее важных водорастворимых низкомолекулярных АО считают
аскорбиновую кислоту, действие которой распространяется на широкий
спектр АКМ. Способность аскорбиновой кислоты восстанавливать
токоферил-радикалы обеспечивает синергическое действие системы
аскорбат-токоферол в гетерогенных средах, содержащих водную и липидную
фазы [24].однако в присутствии ионов металлов переменой валентности
аскорбиновая кислота способна восстанавливать их, и, таким образом
проявлять прооксидантное действие [8].

Мочевая кислота, помимо способности хелатировать ионы железа и меди,
обладает прямым антиоксидантным действием за счет способности
ингибировать оксиды азота, супероксид-анион радикал, гидроксильный
радикал и синглетный кислород, а также гемовые оксиданты. Реакция
мочевой кислоты с гидроксильным радикалом при физиологических рН в
большинстве случаев приводит к конформационной перестройке молекулы с
образованием аллантоина, в свою очередь способного окисляться
гидроксильным радикалом до парабановой кислоты [11]. Ввиду высокого
содержания мочевой кислоты в плазме крови (0,12-0,48 мМ), некоторые
исследователи считают, что на ее долю приходится 35-65% защиты ЛП от
окисления, 10-15% ингибирования гидроксильного радикала и 12%
ингибирования синглетного кислорода.

В плазме крови имеется большое количество других соединений, способных
взаимодействовать с АКМ и тормозящих развитие свободнорадикальных
реакций посредством хелатирования ионов переменой валентности. К ним
относятся железосвязывающие белки: ферритин, гемосидерин и
трансферрины; медьсвязывающий фермент церулоплазмин; молочная и мочевая
кислот; некоторые пептиды, гормоны и гормоноподобные вещества [11].

Таким образом, учитывая ведущую роль в патогенезе атеросклеротических
повреждений процессов окислительной модификации ЛП, весьма интересным
представляется изучение влияния пищевых АО (особенно жирорастворимых) в
условиях гиперхолестеринемии, сопровождающейся окислительным стрессом,
на атерогенез. Не менее важным представляется проанализировать
комплексное воздействие эссенциальных жирных кислот класса Омега-6,
Омега-3 и АО, так как известно, что ПНЖК являются быстроокисляемым
субстратом (т.е. могут провоцировать развитие антиоксидантной системы),
с одной стороны, и незаменимыми регуляторами состояния эндотелия, тонуса
сосудов и процессов свертывания крови (т.е. могут препятствовать
развитию антиоксидантной системы), с другой стороны.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ ЖИВОТНЫЕ И УСЛОВИЯ ОПЫТОВ

Изучение антиатеросклеротического действия СМЛР выполнено в эксперименте
на животных в общепринятой модели. Эксперимент проведен на 30
половозрелых белых крысах-самцах Вистар весом 270-410 г. В зависимости
от условий эксперимента животные были разделены на 3 равные по
численности группы: контрольную и две опытные.

Таблица 1

Состав экспериментальных рационов

НаименованиеРацион (количество в
г.)1234Казеин197197197197Метионин3333Крахмал445445280280Сахар17517517517
5Отруби50505050Масло подс. контр.*453510-Холина хлорид5555Солевая
смесь**70707070Витаминная
смесь***10101010Холестерин–1010СМЛР****-10-10Масло
окисленное*****–190190* масло в 45 г содержит: ретинола ацетата 15000
МЕ, эргокальциферола – 500 МЕ

** состав солевой смеси представлен в таблице 2

*** в 1 г содержит: тиамина (В1) – 0,6 мг, рибофлавина (В2) – 0,6 мг,
пиридоксина (В6) – 1,5 мг, никотиновой кислоты – 3,0 мг, пантотената
кальция – 1,6 мг, фолиевой кислоты – 1,0 мг, цианкобаламина (В12) –
0,003 мг, викасола – 0,1 мг, Д-биотина – 0,02 мг, токоферола ацетата –
15 мг, глюкозы – до 1 г.

**** – СМЛР содержит (г/100 г): нерафинированное масло льна – 14,3 ,
нерафинированное масло расторопши – 85,7, селена – 0,001 в составе
селенопирана, жирнокислотный состав см. в таблице 3

***** – масло окисленное в 200 г содержит: ретинола ацетата 15000 МЕ,
эргокальциферола – 1500 МЕ

Таблица 2

Состав солевой смеси

№Название солиХимическая формулаКоличество, г1Хлористый натрийNaCl139,3
2Калий фосфорнокислый, однозамещенныйKH2PO4388,83Магний
сернокислыйMgSO457,44Кальций углекислыйCaCO3380,45Железо
сернокислоеFeSO4*7H2O26,46Калий йодистыйKI0,777Марганец
сернокислыйMnSO4*7H204,558Цинк сернокислыйZnSO4*7H2O0,539Медь
сернокислаяCuSO4*5H2O0,4810Кобальт хлористыйCoCl2*6H2O0,02411Натрий
фтористыйNaF0,5012Алюмокалиевые квасцыK2SO4Al2(SO4)3*24H2O0,11ИТОГО1000

На первом этапе эксперимента (14 дней) животные контрольной группы и
первой опытной группы получали рацион, содержащий (по калорийности) 20%
белка (казеин), 70% углеводов, 10% жиров (подсолнечное масло) (таблица
1, рацион 1). Животные второй опытной группы получали рацион с
замещением части жира СМЛР (таблица 1, рацион 2). Витамины и минеральные
вещества добавляли в соответствии с физиологическими нормами (таблица 1
и таблица 2). Корм животным давали вволю, доступ к воде был свободным.

На втором этапе эксперимента (28 дней) животные контрольной группы
получали рацион 1, животные опытных групп получали высокожировой рацион
(ВЖР), содержащий 10 г/кг холестерина и 40% жиров по калорийности
(подсолнечное масло, перекисное число которого составляло 38 ммоль
активного кислорода на 1 кг продукта). В первой опытной группе 5% жира
замещали обычным (неокисленным) подсолнечным маслом (таблица 1, рацион
3), во второй опытной группе – СМЛР (таблица 1, рацион 4).

Таблица 3

Жирнокислотный состав смеси масел льна и расторопши (СМЛР)

НаименованиеКоличество, %Сумма насыщенных жирных кислот
13,71Сумма мононенасыщенных жирных кислот 27,39Сумма ПНЖК, из
них:58,99Линолевая (-6) С18:250,1-линоленовая (-6) С18:30,03-линоленовая
(-3) С18:38,86Соотношение -6/-3 5,66

2.2. ПОДГОТОВКА БИОЛОГИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА ДЛЯ БИОХИМИЧЕСКОГО И
ГИСТОЛОГИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ

После окончания эксперимента животных выдерживали 12 часов без корма,
затем наркотизировали тиопенталом натрия в дозе 6 мг на 100 г веса.
После чего вскрывали брюшную полость, пунктировали брюшную аорту и
собирали кровь в пробирки с гепарином, центрифугировали 15 мин при 2000
об/мин. Готовые гемолизаты эритроцитов (разведение 1:1) и плазму затем
замораживали и хранили при – 18°С- – 20°С до исследования. Затем
перфузировали печень in situ через соустье полой вены охлажденным
физиологическим раствором. Далее извлекали печень, промывали охлажденным
физраствором, продавливали через металлический пресс с диаметром
отверстий 0,2 мм и готовили гомогенаты. Печень гомогенизировали в
стеклянном гомогенизаторе Поттера-Эльвейма с тефлоновым пестиком (зазор
0,18-0,2 мм) в течение 90 с при 1200 об/мин. Гомогенат хранили при
–18°С- – 20°С.

Для гистологического исследования брали грудной и брюшной отдел аорты.
Аорту фиксировали 10% формалином, вскрывали по длине, проводили
макроскопическое исследование, далее готовили срезы методом парафиновой
проводки, окрашивали гематоксилином + эозином, проводили
микроскопическое исследование

2.3. СПЕЦИАЛЬНЫЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.3.1. Изучение антиоксидантных свойств селенопирана in vitro

Изучение антиоксидантных свойств СП in vitro проводили в системе
нерафинированных растительных масел: подсолнечного, смеси масел льна и
расторопши пятнистой. В модельной системе с подсолнечным маслом для
сравнения использовали бутилокситолуол (БОТ) и ТФ. При этом концентрация
АО (в том числе и СП) составляла 0,01% от массы. Контролем служило
чистое масло. Окисление проводили при температуре 80 С, пропуская через
масло воздух со скоростью 5 л/ч. Автоокисление смеси масел льна и
расторопши (1:6, v/v) проводили в мягких условиях – при комнатной
температуре без принудительного пропускания воздуха. СП или ТФ добавляли
в смесь масел в концентрации 0,005%. Контролем служила смесь масел без
АО. Количество пероксидов определяли йодметрическим титрованием [ГОСТ
26593-85].

2.3.2. Определение перекисного числа йодометрическим титрованием по ГОСТ
26593-85

Метод основан на окислении йодистого калия перекисями и гидроперекисями,
содержащимися в образце, в растворе уксусной кислоты и хлороформа и
титровании выделившегося йода раствором тиосульфата натрия.

Пробу отвешивают в колбу или пробирку, помещают навеску в колбу.
Добавляют 10 см3 хлороформа, растворяют навеску, приливают 15 см3
уксусной кислоты и 1 см3 раствора йодистого калия, колбу сразу же
закрывают, перемешивают содержимое в течение 1 мин и оставляют на 5 мин
в темном месте при температуре 15-25°С. Затем добавляют 75 см3 воды,
тщательно перемешивают и добавляют пять капель раствора крахмала.
Выделившийся йод титруют раствором тиосульфата натрия, используя раствор
следующей концентрации в зависимости от предполагаемого значения
перекисного числа. С (1/2Na2S2O3) = 0,002 мольдм3 , если перекисное
число не более 6,0 молькг или с (1/2Na2S2O3) = 0,01 мольдм3, если
перекисное число равно или более 6,0 молькг [Издательство стандартов,
1994]. Массу пробы, необходимой для измерений, в зависимости от
предполагаемого перекисного числа определяют по таблице:

Предполагаемое значение перекисного числа, молькгМасса испытуемой пробы,
гОт 0 до 6,05,000-2,000От 6,0 до 102,000-1,200От 10,0 до
15,01,200-0,600От 15,0 до 25,00,600-0,500От 25,0 до 40,00,500-0,300

Для каждой испытуемой пробы выполняется два измерения. Контрольные
измерения проводят параллельно с основными измерениями. Если на
контрольное измерение пойдет более 0,1 см3 (0,01 мольдм3) раствора
тиосульфата натрия, то проверяют соответствие реактивов стандарту.

Вычисление результатов измерения: Перекисное число Х в миллимолях
активного кислорода на килограмм пробы вычисляют по формуле

Х = (V1-V0)*c*1000 m

V0 –объем раствора тиосульфата натрия, использованный при контрольном
измерении, см3

V1 – объем раствора тиосульфата натрия, использованный при измерении,
см3

C – концентрация использованного раствора тиосульфата натрия мольдм3

1000 – коэффициент учитывающий пересчет результата измерения в ммолькг

m – масса испытуемой пробы, г

За результат измерения принимают среднее арифметическое значение двух
параллельных измерений.

2.3.3. Определение концентрации общего холестерина (ХСобщ) в сыворотке и
плазме крови энзиматическим колориметрическим методом

ПРИНЦИП МЕТОДА. При гидролизе ЭХС холестеразой образуется свободный ХС.
Образуется и имеющийся в пробе ХС: окисляется кислородом воздуха под
действием холестеролоксидазы с образованием эквимолярного количества
перекиси водорода. Под действием (РОД) перекись водорода окисляет
хромогенные субстраты с образованием окрашенного продукта. Интенсивность
окраски пропорциональна концентрации в пробе.

Набор реагентов: CHOLESTEROL «E – D» («Vital-Diagnostics»)

ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА

РеагентыОпытные

пробы,(мл.)Калибровочные пробы, (мл.)Контрольные пробы, (мл.)Сыворотка
или плазма0,02__Физ. Раствор (H2O)__0,02Реагент 22,02,02,0Раствор
холестерина_0,02_

Реакционную смесь перемешивают и инкубируют не менее 5 мин при комнатной
температуре (20-25°С) или при 37°С и измеряют оптическую плотность
опытных и калибровочных проб против контрольной пробы в кювете с
толщиной поглощающего слоя 5 см (1 см.) при длине волны 500 нм (ФЭК- 490
нм). Окраска стабильна не менее 2-х часов после окончания инкубации при
предохранении от прямого солнечного света.

Расчет концентрации холестерина проводят по формуле:

С = [Ео/Ест ] * 5,17 (ммоль/л) или С =[ Ео/Ест ] * 200 (мг/100 мл)

Ео и Ест – экстинция образца и стандарта, измеряется относительно
контрольной пробы.

2.3.4. Определение концентрации триглицеридов (ТГ) в сыворотке и плазме
крови энзиматическим колориметрическим методом

Тглицериды липаза глицерин + жирная кислота

Глицерин + АТФ глицерокиназа глицерил-3-фосфат +2 H2O

Глицерил-3-фосфат + O2 ГФО диоксиацетон фосфат +2 H2O

H2O2 + 4-ААР + 4-хлорфенол пероксидаза хинонимин +
4H2O

Набор реагентов: TRIGLYCERIDES «E – D» («Vital-Diagnostics»)

ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА

РеагентыОпытные пробы, (мл.)Калибровочные пробы, (мл.)Контрольные пробы,
(мл.)Сыворотка или плазма0,02__Физ. Раствор
(H2O)__0,02Реагент2,02,02,0Стандартный раствор_0,02_

Реакционную смесь перемешивают и инкубируют не менее 5 мин при комнатной
температуре (20-25°С) и измеряют оптическую плотность опытных и
калибровочных проб против контрольной пробы в кювете с толщиной
поглощающего слоя 5 см (1 см.) при длине волны 505 нм (ФЭК- 490 нм).
Окраска стабильна не менее часа после окончания инкубации при
предохранении от прямого солнечного света. (таблица).

Расчет концентрации триглицеридов проводят по формуле:

С = [Ео/Ест *250] – 10 (мг/100мл) или С = [Ео/Ест *2,85] – 0,11ммоль/л

Ео и Ест – экстинция образца и стандарта, измеряется относительно
контрольной пробы. 10 мг/100мл (0,11ммоль/л) – поправка на содержание
свободного глицерина в сыворотке (плазме крови).

2.3.5. Определение концентрации ХС-ЛВП (холестерина-липопротеидов
высокой плотности) (HDL) в сыворотке и плазме крови

ПРИНЦИП МЕТОДА. Хиломикроны, липопротеиды низкой плотности (LDL) и
липопротеиды очень низкой плотности (V LDL) осаждаются при добавлении к
образцу фосфовольфрамат/Mg?+. После центрифугирования в супернатанте
остаются только HDL, концентрация которых определяется так же как
концентрация общего холестерина.

Набор реагентов: HDL CHOLESTEROL «FL – E» («Vital-Diagnostics»)

ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА

1. Преципитация

РеагентыОпытные пробы, (мл.)Калибровочные пробы, (мл.)Контрольные пробы,
(мл.)Сыворотка или плазма0,15__H2O__0,15Осаждающий
реагент0,30,30,3Раствор холестерина_0,15_

Хорошо перемешать и оставить на 10 мин при комнатной температуре.
Опытные пробы отцентрифугировать в течение 10 мин при 4000g или 1-2 мин
1000g. Прозрачный супернатант использовать для определения концентрации
HDL. Калибровочные и контрольные пробы центрифугировать не нужно.
Определение холестерина во всех пробах в течение часа.

2. Определение концентрации HDL

РеагентыОпытные пробы, (мл.)Калибровочные пробы, (мл.)Контрольные пробы,
(мл.)Супернатант0,2_-H2O+ реагент №1__0,2Рабочий реагент для определ.
холестерина0,20,20,2Раствор холестерина+реагент №1_0,2_

Реакционную смесь тщательно перемешивают и инкубируют не менее 10 мин
при комнатной температуре (20-25°С) или 5 мин при 37°С и измеряют
оптическую плотность опытных и калибровочных проб против контрольной
пробы в кювете с толщиной поглощающего слоя 5 см (1 см.) при длине волны
500 нм (ФЭК- 490 нм). Окраска стабильна не менее 2-х часов после
окончания инкубации при предохранении от прямого солнечного света.

Расчет концентрации (С) холестерина HDL проводят по формуле:

С = Ео/Ест * 1,29 (ммоль/л) или С = Ео/Ест * 50 (мг/100 мл) Ео и Ест –
экстинция образца и стандарта, измеряется относительно контрольной
пробы.

2.3.6. Определение ХС-ЛОНП (холестерина-липопротеидов очень низкой
плотности) расчетным методом

Уровень ХС-ЛОНП находят путем деления показателя концентрации
триацилглицеринов на 2,2 (ТГ/2,2). Вывод этой формулы расчетов
базируется на том, что, во-первых, при отсутствии в крови хиломикронов
(а они после 12-часового голодания у большинства пациентов не
выявляются) практически все количество ТГ крови сосредоточено в ЛОНП и
,во-вторых, при не слишком высокой концентрации в крови (когда
содержание ТГ не привышает 4,4 ммоль/л) в частицах ЛОНП на 22 молекулы
ТГ приходится 10 молекул холестерола [12].

2.3.7. Определение ХС-ЛНП (холестерина липопротеидов низкой плотности)
расчетным методом

Зная уровень ХСобщ плазмы, ХС-ЛВП и ХС-ЛОНП, нетрудно определить
содержание ХС-ЛНП по формуле [12]:

ХС-ЛНП = ХС – (ХС-ЛВП + ХС-ЛОНП)

2.3.8. Определение индекса атерогенности (ИА) расчетным методом

Расчет индекса атерогенности призводят по формуле:

ХСпл – F-ХС /F-ХС Х (ЭХС/СХС)

ХСпл – общий холестерол плазмы

F-ХС (альфа-ХС) – холестерол супернатанта (ЛПВП)

ЭХС/СХС – отношение содержания эфиросвязанного и свободного холестерола
супернатанта плазмы [12] .

2.3.9. Определение содержания диеновых коньюгатов(ДК) в эритроцитах

За основу взят классический метод Placer в модификации Гаврилова В. Б.
[9] для эритроцитов. 0,5 мл гемолизата эритроцитов (1:1) смешивают в
пробирках с притертой крышкой с 4 мл чистоперегнанных растворов
изопропанол : гептан (1:1). Смесь встряхивают постоянно не менее одного
часа затем добавляют 1 мл HCl (pH=2) после чего еще раз встряхивают две
минуты, добавляют 2 мл чисто перегнанного гептана и снова встряхивают
10-15 мин. Примерно через 1-2 часа отбирают верхнюю фазу и фотометрируют
при 232нм против контрольной пробы (Афон) где вместо гемолизата взято
0,5 мл H2O. Коэффициент экстинции при 233 нм –

2,2 * 10 -5 см-1 М-1. Формула для расчета: С(нмоль/мл эр)= (Аоп – Афон)
* 36,4

2.3.10. Определение содержания ДК в плазме крови и гомогенате печени

За основу взят классический метод Гаврилова В.Б. и соавт [9],
Владимирова Ю.А. и соавт. [7]. 0,4 мл плазмы вносят в пробирку с плотной
крышкой и добавляют 4 мл чисто перегнанной смеси изопропанол : гептан
(1:1). Смесь встряхивают в течение 20-30 мин затем добавляют 1 мл HCl
(pH=2) после чего еще раз встряхивают две минуты, добавляют 2 мл чисто
перегнанного гептана и снова встряхивают 10-15 мин. Примерно через час
отбирают верхнюю фазу и фотометрируют при 232 нм против контрольной
пробы где вместо гемолизата взято 0,2 мл H2O. Коэффициент экстинции 2,2
* 10 -5 см-1 М-1. Формула для расчета (при l=1 см):

С(нмоль/мл пл) = [(?А* 106)/(2,2*105*1)]*[4/Vпроб], где: ?А = Аоп –
Афон, 2,2*105 – коэффициент экстинции, 1 (см) = L (толщина кюветы), 2
(мл) = Vгепт (объем гептана)

2.3.11. Определение содержания малонового диальдегида (МДА) в
эритроцитах

За основу взят классический метод Ernster et al [25] в модификации для
эритроцитов. 0,5 мл гемолизата эритроцитов (1:1) смешивают с 1 мл
охлажденной 5% ТХУ и тщательно растирают смесь стеклянной палочкой.
После выдерживают при 0±5 °С не менее 1-2 часов смесь центрифугируют при
4000 g 30 мин. Далее тщательно отбирают 0,4мл надосадка в пробирки для
кипячения и добавляют 1,0 мл 0,5% тиобарбитуровой кислоты. Смесь
инкубируют в кипящей воде более 10 мин после чего охлаждают и
фотометрируют при 532 нм против соответствующего контроля. В расчет
принимают коэффициент молярной экститнции – 1,56*105 см-1 М-1.
С(нмоль/мл эр) = ?А * 115,8

2.3.12. Определение содержания МДА в плазме крови и печени

За основу взят классический метод Mihara et al. [30]. 0,4 мл плазмы
крови смешивают с 4 мл охлажденной 1,4% ортофосфорной кислоты и 2 мл
0,5% тиобарбитуровой кислоты. Смесь инкубируют в кипящей бане 45 мин
после чего охлаждают и добавляют 4 мл н-бутанола. Смесь встряхивают до
образования белой суспензии, после чего центрифугируют при 4000 g 20
мин. Верхнюю фазу фотометрируют при 532 нм против контрольной пробы.
Коэффициент экстинции – 1,56*105 см-1 М-1. Формула для расчета (при L=1
см). С (нмоль/мл )= ?А * 64,2

2.3.13. Определение жирнокислотного состава масел методом газожидкостной
хроматографии (метод внутренней нормализации)

1 мл масла смешивают с 5 мл метанола, добавляют 1 мл метилирующего
агента (раствор гидроксида тетраметиламмония) и 3 мл эфира серного
(диэтиловый). Выдерживают в течение 10-15 мин при комнатной температуре,
аликвотную часть отбирают для анализа (3-5 мкл) и хроматографируют.

Режим разделения: Температура колонки 170-190°С, Температура
впрыскивающей камеры 250°С, Колонка насадочная 3 м, Содержание колонки:
5% диэтиленгликольсукцинат нанесенный на хроматон N-AW. Анализ проводят
относительно количества жирных кислот.

2.3.14. Гистологический анализ

Выполняли для подтверждения наличия атеросклеротических изменений в
опытных группах. Для гистологического исследования брали грудную и
брюшную аорту, фиксировали 10% нейтральным формалином. Гистологическое
исследование выполняли сотрудники гистологической лаборатории.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

3.1. ИССЛЕДОВАНИЯ АНТИОКСИДАНТНЫХ СВОЙСТВ СЕЛЕНОПИРАНА

Данные исследования антиоксидантных свойств СП по сравнению с БОТ, ТФ и
СП при термическом окислении подсолнечного масла (Таблица 1)
свидетельствуют о том, что антиоксидантная активность СП не уступает
активности БОТ, и даже превосходит ее.

Рисунок 1

Динамика накопления пероксидов в смеси нерафинированных растительных
масел в присутствии бутилокситолуола, селенопирана и токоферола
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Преимущество СП становится заметным уже в течение 1-го часа окисления.
Отмечено, что введение в смесь СП приводило к снижению концентрации
пероксидов, и только к 6 часу их накопление достигло величин,
превышающих исходные. К 26 часу окисления концентрация пероксидов в
системе с БОТ составляла 95,65%, с СП – 85,51%, с ТФ – 111,6% по
отношению к контролю.

Таблица 1

Динамика накопления пероксидов в подсолнечном масле в присутствии
бутилокситолуола, селенопирана и токоферола

ЧасыКонцентрация пероксидов,
ммоль/гконтрольБОТСПТФ00,00600,00600,00600,006010,00900,00700,00450,0060
30,01000,00800,00550,010060,01310,01300,00900,0170110,03000,02500,02100,
0280180,04800,04600,03800,0520260,06900,06600,05900,0770

При щадящем режиме окисления смеси растительных масел СП в качестве АО
также имел преимущества перед ТФ (Рис. 1), что позволило выбрать его для
стабилизации итогового продукта – композиции нерафинированных масел льна
и расторопши.

3.2. ИЗМЕНЕНИЯ БИОХИМИЧЕСКИХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ ТКАНЕЙ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ
ЖИВОТНЫХ

Результаты комплексного биохимического и гистологического анализа
биоматериала, полученного от экспериментальных животных, свидетельствуют
о существенном торможении развития атеросклеротических процессов при
введении СМЛР в качестве добавки к ВЖР.

Достоверные различия между опытными группами обнаруживались как в
количестве липидов плазмы крови, так и в их соотношении (Таблица 2). В
первой опытной группе наблюдались характерные признаки нарушения
липидного обмена: повышение ХСобщ на 54% и ХС-ЛНП на 350 % по сравнению
с контрольной группой, на фоне снижения содержания ХС-ЛВП на 57 %. При
этом ИА повышался до 6,29 по сравнению с 1,03 в контроле. Введение в ВЖР
животных второй опытной группы СМЛР привело к торможению накопления в
плазме ХС, снижение на 38 % и снижение концентрации ХС атерогенных ЛП:
ХС-ЛНП на 272% и ХС-ЛОНП на 55% по сравнению с контролем, а также к
повышению содержания ХС-ЛВП 42%, что отразилось на величине ИА – 3,91.

Таблица 2

Липидограмма плазмы экспериментальных животных

ГруппаТГ

ммоль/лХС общ.,

ммоль/лХС-ЛВП, ммоль/лХС-ЛНП,

ммоль/лХС-ЛОНП,

ммоль/лИндекс

Атероген.,

у.е.Контроль

n=10

0,906

0,0311,74

0,0520,858

0,0240,459

0,0490,421

0,0191,03

0,069Опытная 1

n=10

0,512#

0,0442,68#

0,0830,372#

0,012,07#

0,080,240#

0,0186,29#

0,393Опытная 2

n=100,442#

0,0152,40# *

0,0830,496# *

0,0251,71# *

0,0770,191# *

0,0073,91# *

0,235Примечание: * – p

Нашли опечатку? Выделите и нажмите CTRL+Enter

Похожие документы
Обсуждение

Оставить комментарий

avatar
  Подписаться  
Уведомление о
Заказать реферат!
UkrReferat.com. Всі права захищені. 2000-2019