27
ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО ПО ОБРАЗОВАНИЮ
Пензенский государственный педагогический университет
имени В. Г. Белинского
Факультет Кафедра
Естественно-географическийБиохимии
ДИПЛОМНАЯ РАБОТА НА ТЕМУ:
Свободно-радикальные процессы
при экспериментальной ишемии головного мозга
Студент________________________________________Заварзина В. А.
Руководитель___________________________________Фирстова Н. В.
____________________Левашова О. А.
К защите допустить. Протокол № от «_____» ____________2008 г.
Зав. кафедрой ____________________________________Генгин М. Т.
Пенза, 2008 год
СОДЕРЖАНИЕ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Этиология и патогенез ишемии мозга
1.2. Свободно-радикальное окисление и антиоксидантная защита при
патологии головного мозга
1.2.1. Свободно-радикальное окисление: общие сведения
1.2.2. Продукты перекисного окисления липидов (диеновые коньюгаты,
ТБК-реактанты, шиффовы основания)
1.2.3. Процессы свободно-радикального окисления липидов в развитии и
течении острых нарушений мозгового кровообращения
1.2.3.1. Малоновый диальдегид (МДА) как интегральный показатель
процессов свободно-радикального окисления
1.2.3.2. Биохемилюминесценция как метод оценки состояния
свободно-радикальных процессов при ишемическом инсульте мозга
1.2.4. Антиоксидантная система: контроль за процессами перекисного
окисления липидов при ишемии мозга
1.3. Модели ишемии
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Материалы исследования
2.2. Методы исследования
2.2.1. Моделирование неполной ишемии у крыс
2.2.2. Метод определения концентрации малонового диальдегида в сыворотке
крови
2.2.3. Метод люминолзависимой хемилюминисценции в цельной крови
2.3. Статистическая обработка результатов исследования
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
3.1. Свободнорадикальные процессы при ишемическом инсульте
3.2. Исследование активности хемилюминесценции цельной крови и
концентрации МДА в сыворотке крови при экспериментальной ишемии
головного мозга
3.2.1 Показатели свободнорадикального окисления при моделировании ишемии
головного мозга
3.2.1.1. Исследование динамики ТБК-активных продуктов при моделировании
ишемии головного мозга
3.2.1.2. Исследование динамики показателей хемилюминесценции при
моделировании ишемии
ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ
ВЫВОДЫ
ЛИТЕРАТУРА
ПРИЛОЖЕНИЕ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
АО – антиоксидантная система
АОЗ – антиоксидантная защита
АФК – активные формы кислорода
ДК – диеновые конъюгаты
DAG – диацилглицерол
ЛХЛМ – люминолзависимая хемилюминесценция
МДА – малоновый диальдегид
НК – нуклеиновые кислоты
ОНМК – острая недостаточность (нарушения) мозгового кровообращения
ПОЛ – перекисное окисление липидов
СМА – средняя мозговая артерия
СОД – супероксиддисмутаза
СР – свободные радикалы
СРБ – С-реактивный белок
СРО – свободно-радикальное окисление
ТБК – тиобарбитуровая кислота
ХМЛ – хемилюминесценция
ВВЕДЕНИЕ
В последние годы новейшие достижения в биохимии создали необходимые
предпосылки для успеха в смежных областях и в первую очередь в медицине.
В этой связи неизмеримо возросло значение патологической биохимии как
отрасли науки, изучающей молекулярные основы различных форм болезней.
К наиболее распространенным заболеваниям зрелого‚ пожилого, а в
последние десятилетия и молодого возраста относятся острые нарушения
мозгового кровообращения (ОНМК). Летальность в острый период инсульта
достигает 35 %, увеличиваясь почти на 15 % к концу первого года
заболевания. Соотношение геморрагических и ишемических нарушений
мозгового кровообращения составляет 1:4-5. Риск повторного инсульта
оценивается в 8-20 %. Постинсультная инвалидизация занимает первое место
среди всех возможных причин утраты трудоспособности, к прежней работе
возвращаются лишь около 20 % лиц, перенесших инсульт, при этом одна
треть больных – люди социально активного возраста [52]. В последние
десять лет в России ежегодно регистрируется около 400000 инсультов, из
них чаще (70-80 %) встречаются ишемические инсульты, более редко (20-30
% и 5 % соответственно) кровоизлияние в мозг и субарахноидальное
кровоизлияние [19]. Исследования последних лет доказали, что гибель
нервной ткани при ишемии происходит в результате каскада
патобиохимических и патофизиологических процессов [20, 21].
Активация свободнорадикальных процессов при ишемии мозга приводит к
развитию оксидантного стресса, являющегося одним из универсальных
механизмов повреждения тканей. В связи с этим представляет интерес
исследование процессов свободнорадикального окисления (СРО) в крови.
Современным методом для изучения интенсивности свободно-радикальных
процессов, в частности перекисного окисления липидов (ПОЛ) является
регистрация индуцированной биохемилюминесценции биологических объектов.
Этот метод применяется для диагностики нарушений липидного обмена,
воспалительных, инфекционных и онкологических заболеваний. В клинических
условиях хемилюминесцентный показатель может быть применен для
определения остроты процесса, степени тяжести по динамике значений
хемилюминесценции.
Интенсивность процессов ПОЛ может быть‚ в частности‚ исследована при
определении количества образующегося при физиологических и
патологических процессах вторичного продукта ПОЛ – малонового
диальдегида [57]. Увеличение концентрации малонового диальдегида
является свидетельством усиления ПОЛ и срыва антиоксидантной защиты [2].
Известно, что решению медико-социальных проблем, возникающих в связи с
распространенностью инсульта, способствует изучение механизмов
заболевания на различных экспериментальных моделях [65].
Целью нашей работы было исследование процессов свободно-радикального
окисления в цельной крови и сыворотке на экспериментальной модели
неполной ишемии головного мозга крыс.
При выполнении данной работы были поставлены следующие задачи:
1. Провести исследование концентрации ТБК-АП (МДА) в сыворотке крови при
окклюзионном повреждении мозга в динамике экспериментальной острой
ишемии мозга (модель неполной ишемии).
2. Провести исследование концентрации ТБК-АП (МДА) в сыворотке крови при
реперфузионном повреждении мозга в динамике экспериментальной острой
ишемии мозга (модель неполной ишемии).
3. Провести исследование показателей хемилюминесценции цельной крови при
окклюзионном повреждении мозга в динамике экспериментальной острой
ишемии мозга (модель неполной ишемии).
4. Провести исследование показателей хемилюминесценции цельной крови при
реперфузионном повреждении мозга в динамике экспериментальной острой
ишемии мозга (модель неполной ишемии).
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Этиология и патогенез ишемии мозга
Острые нарушения мозгового кровообращения – наиболее распространенные
заболевания головного мозга в зрелом и пожилом возрасте. Преобладающими
нарушениями церебрального кровотока является очаговая ишемия мозга,
которая развивается в 4 раза чаще, чем кровоизлияние в мозг [8, 14, 20,
51, 68]. Ишемия представляет собой ухудшение (неполная) или полное
прекращение (тотальная) всех трех функций локального кровоснабжения:
доставки кислорода в ткань, доставки пластических веществ – субстратов
окисления и удаление продуктов метаболизма [3].
Развитие ишемического инсульта, является наиболее серьезным осложнением
ишемической болезни мозга. Среди этиологических факторов наибольшее
значение имеют атеросклероз и гипертоническая болезнь как наиболее
значимые сосудистые заболеваниям. Не следует забывать об экстравазальных
компрессиях, особенно компрессиях позвоночных артерий в области шеи при
дегенеративных изменениях в позвоночнике. В результате компрессий
возникает редукция мозгового кровотока, которая вызывает развитие
последующей ишемии мозга. Среди основных причин кардиогенных эмболий –
мерцательная аритмия различной этиологии, инфаркт миокарда и его
последствия, эндокардит, кардиомиопатия. Эти факторы наиболее угрожаемы
для развития инсульта и именно мерцательная аритмия является самым
значимым фактором риска развития ишемического инсульта [61].
Исследования последних лет позволили по-новому взглянуть на динамику
процессов повреждения нервной ткани при церебральной ишемии, которая
подразумевает каскадность метаболических изменений [20, 31]. На ранней
стадии ишемии повреждение мозгового вещества может быть обратимым, что
подчеркивает важность и необходимость комплексных исследований
биохимических процессов.
В настоящее время выделяют 4 патогенетических вариантаишемического
инсульта: атеротромбический, эмболический, гемодинамический и
микроциркуляторный. Атеротромбический инсульт составляет примерно 20-30
% и вызван тромбозом, развивающимся обычно на месте атеросклеротической
бляшки. Прецеребральные артерии (позвоночные, сонные), крупные и средние
церебральные артерии поражаются атероматозными бляшками. Увеличение
атеротромботической бляшки может привести к сужению просвета артерии и
её полной закупорке. Снижение кровотока возникает при гемодинамически
значимом стенозе – сужении просвета сосудов до 70-75%.
Эмболический инсульт является причиной 20-25 % ишемических инсультов и
чаще обусловлен кардиогенной эмболией (кардиоэмболический инсульт) или
эмболией из аорты и крупных вне- или внутричерепных артерий
(артерио-артериальная эмболия).
Лакунарные инсульты, обусловленные поражением мелких внутримозговых
сосудов, часто вследствие артериальной гипертензии, составляют 20-25 %
всех острых церебральных ишемий. Значительно меньший удельный вес имеет
инсульт, развивающийся по механизму гемореологической окклюзии [8, 9,
14, 32, 68].
Многолетнее изучение механизмов формирования острой недостаточности
мозгового кровообращения позволило выделить 4 группы основных
патогенетических факторов [5, 7, 17, 18, 66].
1) морфологические изменения сосудов, кровоснабжающих головной мозг
(окклюзирующие поражения, аномалии развития и т.д.);
2) расстройства общей и церебральной гемодинамики, которые способствуют
снижению кровотока до критического уровня с формированием
сосудисто-мозговой недостаточности;
3) изменение физико-химических свойств крови, в частности, её
свёртываемости, агрегации форменных элементов, вязкости, других
реологических свойств:
4) индивидуальные и возрастные особенности метаболизма мозга,
вариабельность которых обусловливает различия реакций на локальное
ограничение мозгового кровотока.
Независимо от причины, которая привела к ишемии мозга, развивается
каскад патобиохимических изменений, которые в итоге завершаются
повреждением нервной ткани по механизмам некроза и апоптоза.
Одним из важных механизмов в запуске указанного каскада является
снижение мозгового кровотока. В норме, когда оптимальный объём мозгового
кровотока составляет 50-60 мл/100 г/мин, мозг получает необходимую
энергию в результате окисления глюкозы и образования АТФ, причём
окисление одной молекулы глюкозы даёт 38 молекул АТФ. При ишемии
вследствие недостатка кислорода возникает анаэробный путь расщепления
глюкозы, и из одной её молекулы образуется только 2 молекулы АТФ.
При снижении уровня кровотока менее 55-50 мл на 100 г в 1 мин возникает
первый критический уровень в виде торможения белкового синтеза.
Дальнейшее снижение кровотока, до 35 мл на 100 г в 1 мин – второй
критический уровень – приводит к активации анаэробного гликолиза и
увеличению концентрации лактата, развитию лактат-ацидоза и тканевого
цитотоксического отёка. Продолжающееся снижение кровотока до 20 мл на
100 г в 1 мин – третий критический уровень – приводит к снижению синтеза
АТФ, формированию энергетической недостаточности, к дисфункции каналов
активного ионного транспорта (выходу К+ из клетки и перемещению Na+ и
Са2+ в клетку), дестабилизации клеточных мембран и избыточному выбросу
возбуждающих нейромедиаторов – глутамата и аспартата (возникает так
называемая “глутаматная эксайтотоксичность”). Перевозбуждение
НМДА-рецепторов (N-метил-Д-аспартат) приводит к раскрытию новых
кальциевых каналов, вследствие чего обеспечивается дополнительный приток
Са2+ в нейроны. Когда мозговой кровоток достигает 20% от нормальной
величины (10-15 мл на 100 г в 1 мин), развивается аноксическая
деполяризация мембран, которая считается главным критерием необратимого
поражения клеток [20, 51].
В развитии каскада патобиохимических и патофизиологическихпроцессов
выделяют три основные этапа: индукции (запуск), амплификации (усиление
повреждающего потенциала) и экспрессии (конечные реакции каскада) [20].
Этап индукции. Дефицит макроэргических субстратов в мозге приводит к
«обесточиванию» Na+- K+ – АТФ-азной ферментной системы, которая
управляет энергозависимым ионным транспортом. Нарушение активного
ионного транспорта обусловливает пассивный отток К+ из клеток, приток
Са2+, что приводит к деполяризации клеточных мембран. Внутриклеточное
накопление ионов Са2+ при мозговой ишемии вызывает перегрузку
митохондрий с разобщением окислительного фосфорилирования и усилением
катаболических процессов; оно сопровождается переходом Са2+ в активную
форму посредством соединения с внутриклеточным рецептором кальмодулином,
что ведёт к активации кальмодулинзависимых протеинкиназ, липаз и
эндонуклеаз, фрагментации дезоксирибонуклеиновых кислот (ДНК), гибели
клетки [21].
Таким образом, уже на самых начальных этапах патобиохимического каскада,
запущенного дефицитом макроэргов, начинается процесс внутриклеточного
накопления кальция, являющийся одним из ключевых механизмов запуска как
некротической, так и программированной смерти нейрона [21].
Важным путём поступления кальция в клетку являются агонистзависимые
кальциевые каналы, особенно те, которые контролируются рецепторами,
активирующимися возбуждающими аминоацидергическими медиаторами –
глутаматом и аспартатом. Повышение их включает компенсаторные механизмы:
обратный захват нейронами и астроцитами избытков из межклеточного
пространства, пресинаптическое торможение выброса медиаторов,
метаболическую утилизацию и др. Однако в условиях ишемии нарушается
высокоселективная система транспорта глутамата и аспартата из
синаптической щели в астроглию за счёт дисфункции каналов активного
ионного транспорта и астроцитоза, изменяется система путей
преобразования медиаторов; это приводит к тому, что абсолютная
концентрация и время пребывания глутамата и аспартата в синаптической
щели превышают допустимые пределы, и процесс деполяризации мембран
нейронов приобретает необратимый характер [21].
Этап амплификации связан с продолжающимся увеличением внутриклеточной
концентрации ионов кальция. Нарастание внутриклеточной концентрации
кальция в сочетании с повышением содержания диацилглицерола (DAG)
изменяет активность ферментов, модифицирующих мембранные белки, в том
числе и глутаматные рецепторы. В результате увеличивается
чувствительность нейронов к возбуждающим сигналам. Замыкается «порочный
круг»: повышенная возбудимость может способствовать дальнейшему
накоплению кальция и усилению выделения глутамата из нервных окончаний.
Согласно экспериментальным данным, в областях мозга с плотно
прилегающими нейронами, содержащими глутаматные рецепторы, одна массивно
деполяризованная клетка индуцирует такое высвобождение глутамата, что
возбуждает соседние нейроны. В результате вступает в силу «механизм
домино» – последовательное распространение метаболических нарушений от
нейрона к нейрону. Таким образом, события, происходящие на этапе
амплификации, не только увеличивают накопление кальция, но и усугубляют
токсичное возбуждение окружающих нейронов [21].
Этап амплификации создаёт условия для третьего этапа – экспрессии, на
котором происходят необратимые изменения, приводящие к клеточной смерти.
Механизмы, непосредственно повреждающие нейроны и глию, изучены наиболее
полно [21].
Избыточное внутриклеточное накопление ионов Са2+ активирует
внутриклеточные энзимы: липазы, протеазы, эндонуклеазы и запускает
каскадный механизм ферментативных реакций, приводящих к катаболическому
повреждению нейрона. Особенно разрушителен распад фосфолипидов в
наружной клеточной мембране и в мембранах внутриклеточных органелл [21].
Таким образом‚ схема последовательных этапов «ишемического каскада» на
основе причинно-следственных связей может иметь вид:
1) снижение мозгового кровотока;
2) глутаматная «эксайтотоксичность»;
3) внутриклеточное накопление ионов кальция;
4) активация внутриклеточных ферментов;
5) повышение синтеза оксида азота и развитие оксидантного стресса;
6) экспрессия генов раннего реагирования;
7) отдаленные последствия ишемии (реакции местного
воспаления,микрососудистые нарушения, повреждения
гематоэнцефалическогобарьера);
8) апоптоз [45].
Ведущим патогенетическим механизмом ишемической смерти нейронов является
избыточная активация глутаматных рецепторов. При этом происходящие в
мозге эксайтотоксические процессы неразрывно связаны с параллельно
протекающими реакциями образования оксида азота, свободнорадикального
окисления, воспаления.
1.2. Свободнорадикальное окисление и антиоксидантная защита
при патологии головного мозга
Свободнорадикальное окисление (СРО) – важный и многогранныйбиохимический
процесс превращений кислорода, липидов, нуклеиновыхкислот, белков и
других соединений под действием свободных радикалов (СР), а перекисное
окисление липидов (ПОЛ) – одно из его последствий [16].
1.2.1. Свободнорадикальное окисление: общие сведения
Свободные радикалы представляют собой соединения, имеющие неспаренный
электрон на наружной орбитали и обладающие высокой реакционной
способностью. К числу первичных свободных радикалов относятся
супероксидный анион-радикал, окись азота, а вторичными свободными
радикалами являются гидроксильный радикал, синклетный кислород, перекись
водорода, пероксинитрит. Образование свободных радикалов тесно связано,
с одной стороны, с появлением свободных электронов при нарушениях
процессов окисления в дыхательной цепи, превращении ксантина, синтезе
лейкотриенов и простагландинов. Эти реакции зависят от активности
ксантиноксидазы, дегидротатдегидрогеназы, альдегидоксидазы‚
холестериноксидазы, ферментов цитохрома Р-450. Синтез супероксид-аниона
инициируется ангиотензином II, который образуется из ангиотензина I под
действием ангиотензинпревращающего фермента [16].
Супероксид-анион может восстанавливать Fe3+ в Fe2+, при взаимодействии
которого с перекисью водорода, перекисями липидов и гипохлоритом
образуются высокотоксичные вторичные радикалы. Из всех свободных
радикалов наибольшей активностью обладают гидроксильный радикал и
пероксинитрит.
Активность свободных радикалов ограничивается антиоксидантами, которые
разрывают цепи молекул при реакциях СРО, разрушают молекулы перекисей.
К числу ферментных антиоксидантов относятся супероксиддисмутаза (СОД),
глютатионпероксидаза, каталаза, находящиеся в клеточных структурах.
Неферментные антиоксиданты – витамины Е, К, С, убихиноны, триптофан,
фенилаланин, церулоплазмин, трансферрин, гаптоглобин, глюкоза,
каротиноиды – блокируют активность свободных радикалов в крови.
Изменения структуры и функции субстратов, на которые действуют свободные
радикалы, зависит, в конечном счете, от соотношения активности СР и
антиоксидантов.
Свободнорадикальное окисление необходимо для нормального
функционирования организма. Об этом свидетельствует, в частности,
потребление более 5 % кислорода на образование супероксидного
анион-радикала. СРО способствует уничтожению отживших клеток, элиминации
ксенобиотиков, предупреждает злокачественную трансформацию клеток,
моделирует энергетические процессы за счет активности дыхательной цепи в
митохондриях, пролиферацию и дифференциацию клеток, транспорт ионов,
участвует в регуляции проницаемости клеточных мембран, в разрушении
поврежденных хромосом, в обеспечении действия инсулина. СРО генерирует
внутриклеточные бактерицидные и вирусоцидные факторы, особенно в
клеточном ядре [1, 22, 49].
Снижение поступления в нейроны молекулярного кислорода и повышение
уровня восстановленности компонентов дыхательной цепи стимулируют
восстановление кислорода по одноэлектронному пути с образованием
свободных радикалов (супероксид-аниона, пероксильного и гидроксильного
радикалов), а также оксидантов нерадикальной природы (пероксида водорода
и аниона гипохлорита), поскольку (О2)- легко реагирует с промежуточными
компонентами дыхательной цепи в восстановленном состоянии.
Высокореакционноспособные радикалы кислорода вызывают окисление
биомакромолекул, а также инициируют цепные процессы перекисного
окисления мембранных липидах (ПОЛ), прямое окислительное повреждение
нуклеиновых кислот (НК) и белков.
Образующееся в процессе ПОЛ гидроперекиси неустойчивы, их распад
приводит к появлению разнообразных вторичных и конечных продуктов ПОЛ,
представляющих собой высокотоксичные соединения (диеновые коньюгаты,
шиффовы основания и др.), которые оказывают повреждающее действие на
мембраны и клеточные структуры. Как следствие образуются сшивки
биополимеров, определяются набуханием митохондрий и разобщение
окислительного фосфорилирования, инактивация тиоловых ферментов,
участвующих в дыхании и гликолизе, дальнейшее разрушение липидной основы
мембран [21].
1.2.2. Продукты перекисного окисления липидов
К первичным продуктам ПОЛ относятся циклические эндоперекиси и
алифатические моно- и гидроперекиси, так называемые липопероксиды и
диеновые конъюгаты [30].
Д???е ??ю?? (ДК) я?яю?я ????? ????? ПОЛ. П? ?????????м ????и ?????? ???ы
????? ??в ???? в ?-????и ? ????ю к ???й ?я?, ?о ???? к ?????ю э?й ???й
?язи с ?????? ДК [64]. Д??в? ??ю??, я?яю??я ????? ????? ПОЛ, ??ся?я к
?????м ??бо??м, ???е ???ают ????ю?е ???? ? ????е?ы, ??и, ???? и ?????е
???ы [54].
Липопероксиды являются весьма нестойкими и подвергаются дальнейшей
окислительной дегенерации. При этом накапливаются вторичные продукты
окисления, наиболее важными из которых являются ненасыщенные альдегиды
(малоновый диальдегид). Продуктами взаимодействия малонового диальдегида
с аминосодержащими соединениями являются шиффовы основания [30].
Ш??? ????я, ?????? ????ия ??й ???ы RRcC=NRcc ?е R и Rc – ???д, ??л ?и
??, Rcc – ??л ?и ?? (в ????м ??? Ш. о. ???ют ??е ???и). Ш??? ????я –
???????е ?и ??????е ????, ??????е в ??, ???ри?е в ?г????х ?????лях. С??е
????я, в б???? ??е об??ют ?? с ????и, в ??? ????х ??? ????ую?я ? ?и? и
????а, в ???? ????х ?????о Ш. о. ????о. Г?ри?ю?я ? ????х ??? (RRcCH –
NHRcc), ????няют ??? ????ия, ????? ????й ???д, ???? b-???о???е ????ия,
???, ??ы. О??ую?я ш??? ????я в ????? ????й ??ц? ??у ?????? ???й ????а ?и
??? ? ????й ??о???й [67]. Н????? ????? ????й Ш?? ???????т ???? и ?о????т
????? ??? [54].
ТБК-????ы (МДА) – ????е ???? ПОЛ. К? ????, ??но?й ????? (МДА) ????ся
т??о ? ??? ??? с ?емя и ??е ???? ?язя?. МДА ?????т ??ая ?? в ??е?
???????в, ?????? и ??? ????в [54]. О?и????я ?? ????? ?????а ??ю??ся в
?м, ?о ? ???т ???? ???в и ???? ????ь ????. В????е э?? ???? ????ся ??е
???й. Н??аю?я ???? ?я??? с ????? ?????и ????: ????з, ????з, ????я ??а?я
и ?. [54].
Гидроперекиси, ненасыщенные альдегиды, являются мутагенами и обладают
выраженной цитотоксичностью. Они подавляют активность гликолиза и
окислительного фосфорилирования, ингибируют синтез белка и нуклеиновых
кислот, нарушают секрецию триглицеридов гепатоцитами, ингибируют
различные мембранносвязанные ферменты [30].
Накопление в организме продуктов ПОЛ (диеновых коньюгатов,
ТБК-реактантов, шиффовых оснований) [6] и развитие эндотоксикоза
приводит к стимуляции монооксигеназной системы, изменениям реакции
липидного, гормонального, иммунного, микроэлементного, нейромедиаторного
статусов, числа мест связывания и сродства рецепторов к лигандам,
истощению антиоксидантной системы [71].
1.2.3. Процессы свободно-радикального окисления липидов в развитии и
течении острых нарушений мозгового кровообращения
В развитии и течении острых нарушений мозгового кровообращения е особое
значение придается усилению процессов свободнорадикального окисления
липидов. Прежде всего, по причине повышенной чувствительности головного
мозга к действию свободных радикалов (50% сухого вещества мозга
составляют ненасыщенные жирные кислоты – основной субстрат
свободно-радикального окисления.) Хотя немалую роль играет
и антиоксидантная система, наделенная функциями контроля за процессами
перекисного окисления липидов, при недостаточности антиоксидантной
системы процессы пероксидации усиливаются, происходит избыточное
образование первичных (свободных перекисных радикалов и гидроперекисей
липидов) и конечных (альдегидов и кетонов) продуктов
свободнорадикального окисления. И те, и другие, действуя на внешние
и внутренние клеточные мембраны, вызывают возникновение мембранной
патологии и энергетического дефицита. Однако более опасными считаются
свободные перекисные радикалы и гидроперекиси липидов, которые оказывают
не только мембраноповреждающее действие, но и обеспечивают
аутокаталитический характер перекисного окисления липидов [35].
Согласно бытующему мнению, резкое увеличение продукции свободных
радикалов приходится на постишемический период, на стадию восстановления
мозгового кровообращения. Вместе с тем некоторые исследователи не
исключают возможность образования свободных радикалов даже при понижении
парциального давления кислорода в тканях с нарушенным кровоснабжением,
поскольку повышение степени восстановленности митохондриальной
дыхательной цепи позволяет кислороду в период острой ишемии
взаимодействовать с промежуточными компонентами этой цепи – убихинонами
– с образованием супероксиданиона [35].
При острой мозговой ишемии на фоне дисбаланса оксидантно-антиоксидантной
системы происходит активация процессов перекисного окисления липидов,
что «в совокупности вызывает развитие дистрофических и деструктивных
изменений нейрональных мембран и формирование неврологического дефицита»
[35].
1.2.3.1. Малоновый диальдегид как интегральный показатель
процессов свободнорадикального окисления
Как правило процессы перекисного окисления липидов (ПОЛ) оцениваются по
скорости и количеству образования одного из конечных продуктов окисления
– малонового диальдегида (МДА).
Малоновый диальдегид (в-диальдегид):
Н – С – СН2 – С – Н
? ?
О О
Активность малонового диальдегида поддерживается на определенном уровне
при участии ферментов антиоксидантной защиты (АОЗ), что позволяет
говорить о перекисном гомеостазе. Нормальная концентрация в крови –
2,5-6,0 мкМ/л. Увеличение концентрации – свидетельство усиленного ПОЛ и
срыва антиоксидантной защиты [2].
Определение количества образующегося малонового диальдегида с помощью
тиобарбитуровой кислоты (ТБ-К) может быть одним из методов оценки
интенсивности процессов перекисного окисления липидов [48, 57]. В основе
метода лежит реакция между малоновым диальдегидом (МДА) и
тиобарбитуровой кислотой, которая при высокой температуре и кислом
значении рН протекает с образованием окрашенного триметинового
комплекса, содержащего одну молекулу МДА и две молекулы тиобарбитуровой
кислоты. Максимум поглощения комплекса приходится на 532 нм [41].
При ишемии мозга в большей степени повышаются вторичные продукты ПОЛ
(МДА), а при реперфузии – первичные [4, 36].
Исследование вторичных продуктов ПОЛ, реагирующих с тиобарбитуровой
кислотой, подтверждает роль перекисного окисления в механизмах развития
острой фокальной ишемии мозга и формирования инфарктных повреждений.
1.2.3.2. Биохемилюминесценция как метод оценки состояния
свободнорадикальных процессов при ишемическом инсульте головного мозга
Одним из методов оценки свободнорадикальных процессов при ишемии
головного мозга является хемилюминесценция. Хемилюминесценцией (ХЛМ)
называется свечение, сопровождающее химические реакции. Она наблюдается
в том случае, если в реакции происходит выделение большого количества
энергии, например в реакции взаимодействия двух радикалов или в реакциях
с участием перекисей. Собственное (“сверхслабое”) свечение клеток и
тканей животных и человека обусловлено реакциями свободных радикалов:
радикалов липидов и кислорода, а также окиси азота, – соединениями,
играющими огромную роль в жизни организма, а при определенных условиях –
и развитии ряда патологических состояний [12].
Регистрация индуцированной биохемилюминесценции биологических объектов
является современным методом для изучения интенсивности
свободнорадикальных процессов, в частности перекисного окисления
липидов. Он применяется для диагностики нарушений липидного обмена,
воспалительных, инфекционных и онкологических заболеваний. В клинических
условиях хемилюминесцентный показатель может быть применен для
определения остроты процесса, степени тяжести по динамике значений
хемилюминесценции.
Метод хемилюминесценции применяется также для определения фагоцитарной
активности клеток крови. Он основан на регистрации активных форм
кислорода, образующихся в процессе фагоцитоза, и связан с их
фагоцитарной активностью [63].
Метод люминолзависимой хемилюминесценции (ХЛМ) характеризует
интенсивность «респираторного взрыва», то есть генерации O2• , O2 и ОН•
лейкоцитами при активации клеток [24].
ЛХЛ цельной крови можно наблюдать в течение 10-12 часов, причем при её
разведении физиологическим раствором или раствором Хенкса интенсивность
ХЛМ увеличивается [13].
Метод люминолзависимой хемилюминисценции можно применять как метод
оценки состояния свободнорадикальных процессов при ишемическом инсульте
головного мозга.
Известно‚ что на первые сутки заболевания у всех больных независимо от
тяжести инсульта интенсивность – как спонтанной, так и индуцированной –
хемилюминесценции сыворотки крови возрастает по сравнению с контрольной
группой, что указывает на активацию процессов свободнорадикального
окисления [38]. В этот же период резко увеличивается амплитуда «быстрой»
вспышки (т. е. интенсивность свечения в момент введения индуктора),
отражающая состояние оксидантной системы, и достоверно увеличивается
коэффициент затухания (т. е. отношение максимальной амплитуды свечения к
минимальной), что косвенно свидетельствует о дисбалансе
оксидантно-антиоксидантной системы.
В дальнейшем, на седьмые сутки, картина меняется. В сравнении с началом
заболевания у всех больных уменьшается амплитуда «быстрой» вспышки и
достоверно увеличивается коэффициент затухания. Вместе с тем у больных с
ишемическим инсультом легкой степени тяжести продолжается незначительное
нарастание процессов пероксидации. У больных с инсультом средней тяжести
снижение индуцированной хемилюминесценции сопровождается достоверным
повышением спонтанной хемилюминесценции в сравнении с первыми сутками
заболевания [35].
У больных перенесших повторные нарушения мозгового кровообращения,
напряжены обе системы – и оксидантная, и антиоксидантная. У больных
с одним или несколькими инсультами в анамнезе дела обстоят иначе: у них
активация оксидантной системы сочетается с истощением антиоксидантной
системы, что ведет к более активной деструкции мозговой ткани при
гипоксии головного мозга [35].
1.2.4. Антиоксидантная система: контроль за процессами перекисного
окисления липидов при ишемии мозга
Окисление и продукция свободных радикалов является неотъемлемой частью
метаболизма живых организмов. Активные формы кислорода (АФК)
генерируются в различных биологических системах в ходе нормального
аэробного дыхания митохондрий. Экзогенными источниками АФК является
ультрафиолетовая радиация, инфекционные агенты (вирусы, бактерии),
провоспалительные цитокины, окислительный стресс. В норме свободные
радикалы участвуют в выполнении важнейших физиологических процессов в
организме: поддержании сосудистого тонуса, в механизмах памяти, реакциях
воспаления, регуляции клеточного роста. Контроль продукции АФК
осуществляет антиоксидантная система, регулирующая баланс образования и
устранения свободных радикалов. В состав этой системы входят ферменты
(супероксиддисмутаза, каталаза и др.), белки (ферритин, трансферрин,
альбумин и др.) и многочисленные низкомолекулярные антиоксиданты
(витамин Е, убихинол, каратиноиды, витамин С и др.).
Для мозга характерна низкая антиоксидантная защита. Именно дефицит
антиоксидантной системы в мозговой ткани объясняет ее особую
чувствительность к продукции свободных радикалов. Составляя всего 2% от
общей массы тела, мозг утилизирует 20-25% получаемого организмом
кислорода, поэтому переход в свободнорадикальную форму даже 0,1%
метаболизируемого нейронами кислорода окажется токсичным для мозговой
ткани [27].
В нормальных условиях процесс перекисного окисления липидов находится
под строгим контролем ферментативных и неферментативных систем клетки,
от чего скорость его невелика. Возникающие нарушения метаболизма при
острой ишемии головного мозга ведут к повышению уровня свободных
радикалов и способствуют накоплению веществ, катализирующих ПОЛ, что, в
конечном итоге, и приводит к ускорению свободнорадикальных реакций, тем
более что в условиях гипоксии проницаемость мембран для кислорода
значительно увеличивается [44, 70]. В процессе ишемии соотношение
продуктов СРО и концентрации антиоксидантов в нейрональных клетках
нарушается. В связи с этим создаются “благоприятные” условия для
интенсификации ПОЛ и накопления токсических липидных перекисей, которые
активно разрушают структуру мембран нейронов, инактивируют ферменты и
усугубляют деструктивные процессы в ткани мозга [46].
Ксантиноксидаза играет главенствующую роль в генерации АФК, вследствие
чего происходит увеличение уровня свободного железа в плазме крови путем
мобилизации железа с ферритином в печени. Гипоксантиокидантную реакцию
можно считать одним из основных источников образования АФК, а также
основной причиной СРО в ишемизированом органе [50].
Существующая в организме физиологическая антиоксидантная (АО) система
представляет собой совокупную иерархию защитных механизмов клеток,
тканей, органов и систем, направленных на сохранение и поддержание в
пределах нормы реакций организма, в том числе в условиях ишемии. Она
включает внутриклеточные антиокислительные ферментные системы,
противодействующие окислительному стрессу и обезвреживающие АФК. К
антиокислительным внутриклеточным ферментам относятся, прежде всего,
супероксиддисмутаза (СОД), осуществляющая инактивацию супероксидного
радикала, и каталаза, разлагающая перекись водорода [43, 73].
Однако регуляция интенсификации ПОЛ осуществляется не только системой
СОД–каталаза. Детоксикация в фосфолипидных структурах происходит главным
образом с помощью ферментов системы глутатиона, и, прежде всего,
глутатионредуктазой, глутатионпероксидазой и глутатионтрансферазой [43,
55].
Особую роль в регуляции ПОЛ играют металлы переменной валентности:
Fe?picscalex1000100090000039d00000002001c0000000000050000000902000000000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,
Cu?picscalex1000100090000039d00000002001c0000000000050000000902000000000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,
Mn?picscalex1000100090000039d00000002001c0000000000050000000902000000000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,
Co?picscalex1000100090000039d00000002001c0000000000050000000902000000000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, из
которых основным прооксидантом в ткани мозга является железо [20, 25].
Так, в условиях церебральной патологии ишемического генеза из клеточного
депо выходит железо, находившееся там в трехвалентном состоянии в
комплексе с ферритином. Под действием супероксид-радикала железо
восстанавливается до Fe2+. Далее по реакции Фентона (Н2О2+ Fe2+?ОН+ОН- +
Fe3+) двухвалентное железо разлагает перекись водорода с образованием
гидроксильного радикала, являясь наиболее долгоживущим,
высокореакционным и токсическим для тканевого метаболизма, что в
конечном итоге приводит к гибели нейронов в условиях окислительного
стресса на фоне ишемии [34].
Итак, обобщая существующие современные представления, следует
подчеркнуть, что усиление СРО играет важнейшую роль в патогенезе ишемии
головного мозга. В первые минуты ишемии за счет остаточного кислорода
продукты липопероксидации особенно энергично накапливаются после
восстановления кровоснабжения. АФК атакуют мембранные структуры клеток и
их органелл, вызывая их деструкцию, деэнергизацию и гибель нейронов,
что, безусловно, требует рациональной фармакологической коррекции [39].
1.3. Модели ишемии головного мозга
Существует 5 основных методик моделирования ишемии головного мозга у
крыс. Метод, предложенный в работе Smr?cka M. и др. [74], заключается во
введении монофиламентного волокна через разрез бифуркации аорты во
внутреннюю сонную артерию, а затем интракраниально. В методе эмболизации
[72] используют введение предварительно изготовленного сгустка
гепаринизированной крови через катетер во внутренней сонной артерии. При
использовании метода, описанного в работе Gill R. и др. [69] производят
лигирование средней мозговой артерии (СМА) через трепанационное
отверстие, выполненное в том месте, где артерия пересекает носовую
расщелину. Метод по Tamura [56] заключается в перевязке СМА через
трепанационное отверстие в области между овальным отверстием и
отверстием зрительного нерва. М?? ? Р?????? [42] з?лю??ся в ?????и ??х
??? и ??лю??? ???й, ????? ????ия ????? ??н? ???й и ??????е ???е?я ?з????
???й.
По мнению авторов [28] наиболее эффективным методом является метод по
Tamura, поскольку он позволяет более точно смоделировать патологические
процессы, возникающие при развитии ишемического инсульта у людей. Однако
этот метод, как и метод, описанный в работе Smr?ka M. является
достаточно сложным в исполнении. Метод эмболизации и метод, описанный в
работе Gill R. являются близкими по эффективности к методу по Tamura,
однако также сложны и отличаются высокой себестоимостью. Метод по
Розвадовскому наиболее прост в использовании, обладает низкой
себестоимостью. Главным его недостатком является возникновение ишемии не
только в бассейне СМА, но и в других отделах головного мозга [28].
При моделировании острой неполной ишемии головного мозга у крыс в тканях
серого вещества наблюдается возрастание процесса пероксидации и
антиагрегационной активности и снижение активности супероксидисмутазы.
При постишемической реперфузии головного мозга в нем остается усиленным
перекисное окисление липидов, возрастает активность антиоксидантных
ферментов, нормализуются тромбоцитоактивирующие и прокоагулянтные
свойства. Изменения указанных реакций в тканях мозга приводили к
нормализации агрегации тромбоцитов и свертывания крови. У больных с
различными нарушениями мозгового кровообращения (ишемический и
геморрагический инсульт) в тканях мозга резко активируются реакции
перекисного окисления липидов, гемостаза и ингибируется фибринолиз. В
крови таких больных снижаются антиоксидантные и увеличиваются
гемостатические функции с ингибированием на этом фоне реакций
фибринолиза.
Использование витаминов-антиоксидантов (А, Е, С, Р) в экспериментальных
условиях у крыс возвращает тромбоцитоактивирующие и прокоагулянтные
свойства его тканей к уровню, наблюдаемому у интактных животных.
Применение на этом фоне ингибиторов агрегации тромбоцитов (аспирина,
индометацина, тиклида) приводило к разным реакциям. Аспирин не
предотвращал усиления агрегационных свойств тканей головного мозга,
вызванных его ишемией (по-видимому, как ингибитор простациклина).
Индометацин, и особенно, тиклид в этом отношении действовали более
благоприятно, снижая агрегационные свойства тканей мозга.
Ткани мозга оказывают регулирующее воздействие на процессы перекисного
окисления липидов и состояние антиоксидантной системы, гемостаза и
фибринолиза, что имеет важное значение для течения упомянутых выше
реакций не только местно (в головном мозгу), но и в общем кровотоке в
условиях нормы и патологии [37].
При моделировании транзиторной фокальной ишемии головного мозга у крыс,
производят перевязку средней мозговой артерии.
В опытах на крысах линии Вистар, у которых моделировали неполную
глобальную ишемию мозга путем двусторонней перевязки сонных артерий,
обнаружено двукратное увеличение генерации оксида азота (NO) и умеренное
повышение содержания вторичных продуктов перекисного окисления липидов в
коре мозга, при этом выявлена высокая степень корреляции между
содержанием NO и выраженностью неврологического дефицита у
ишемизированных животных [58].
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Материалы исследования
Объектом исследования служили цельная кровь и сыворотка крови 56
половозрелых самцов крыс линии Вистар массой 221,2±30,9 г. Животных
содержали в стандартных условиях вивария со свободным доступом к воде и
пище [3].
В эксперименте воспроизводились неполная ишемия головного мозга и
механизм реперфузионного повреждения головного мозга [3].
Все процедуры эксперимента соответствовали требованиям Международных
правил гуманного отношения к животным, отраженным в Санитарных правилах
по оборудованию и содержанию экспериментально-биологических клиник
(вивариев) [3].
Выбор объекта эксперимента был обусловлен сходством ангиоархитектоники
головного мозга крыс и человека, а также близостью основных
гемодинамических параметров [3].
Животных декапитировали под эфирным наркозом (предварительно оценив
состояние неврологической сферы по шкале Mc Graw‚ 1977) и производили
забор крови. Для получения сыворотки кровь центрифугировали при 1000
об/мин в течении 15 мин. Из эксперимента исключалась гемолизированная
сыворотка. Сыворотка использовалась в качестве источника МДА [3].
В работе были использованы семь групп животных (табл.1).
Таблица 1. Группы экспериментальных животных.
Группа животных (n=58)Тип вмешательства1 серия (n=8 )2-часовая окклюзия2
серия (n=8)1 сутки после 2-часовой окклюзии3 серия (n=8 )3 суток после
2-часовой окклюзии4 серия (n=8 )2-часовая окклюзия + 2-часовая
реперфузия5 серия (n=8 )1 сутки после 2-часовой окклюзии + реперфузии6
серия (n=8 )3 суток после 2-часовй окклюзии + реперфузии7 серия
(n=8)Контрольная группа животных (ложнооперированные)
2.2. Методы исследования
2.2.1. Моделирование неполной ишемии у крыс
В эксперименте воспроизводились неполная ишемия головного мозга и
механизм реперфузионного повреждения головного мозга. С этой целью в
нижней трети шеи производился кожный разрез, с обеих сторон выделялся
сосудисто-нервный пучок и на общие сонные артерии после их препаровки
накладывалась лигатура.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Рис 1. Строение виллизиевого круга крысы (по И. В. Ганнушкиной)
Ишемия головного мозга осуществлялась полной перевязкой обеих сонных
артерий. Для создания реперфузионной модели ишемического повреждения на
обе общие сонные артерии на 1 час накладывались клипсы, после чего
кровоток по общим сонным артериям восстанавливали, добиваясь реперфузии
ранее ишемизированной ткани.
Контрольную группу составляло 8 животных аналогичного пола и массы. У
животных контрольной группы воспроизводилась наркотизация, кожный разрез
и выделение артерий без последующей перевязки сосудов. Все хирургические
процедуры проводили под наркозом (внутрибрюшное введение тиопентала
натрия в дозе 40-50 мг/кг, растворенного в 1 мл физиологического
раствора).
О тяжести ишемического повреждения судили по степени неврологического
дефицита, оцениваемого по шкале Stroke-index Mс Graw в модификации НИИ
неврологии РАМН через 2 часа после оперативного вмешательства и по
динамике неврологического дефицита на 1-е и 3-и сутки (Приложение 1.
табл.1).
2.2.2. Метод определения концентрации малонового диальдегида в
сыворотке крови
Концентрацию малонового диальдегида определяли по методу Uchiyama M.,
Mihara M. [75]. К 3 мл 1,4 % ортофосфорной кислоты добавляли 0,25 мл
сыворотки крови, затем приливали 1 мл 0,5 % раствора тиобарбитуровой
кислоты и помещали в кипящую водяную баню на 45 минут. Пробы охлаждали,
добавляли 4 мл бутанола и встряхивали в течение 1 мин до образования
суспензии.
После центрифугирования супернатант, фотометрировали при двух длинах
волн л=535 нм и л=570 нм против холостой пробы в кювете с длинной
оптического пути 1 см. расчет содержания ТБК-активных продуктов
проводили по формуле С=(D535 – D 570 )/0,156 х 16, где С – концентрация
ТБК-активных продуктов в опытной пробе; D535 – оптическая плотность
пробы при 535 нм; D570 – оптическая плотность при 570 нм; 0,156 –
коэффициент молярной экстинкции комплекса малоновый диальдегид-ТБК в
л/мкмоль/см; 16 – коэффициент разведения сыворотки.
2.2.3. Метод люминолзависимой хемилюминесценции в цельной крови
Хемилюминесценцию измеряли на аппарате ХЛМ-003 в соответствии с
инструкцией к прибору и методическими рекомендациями авторов разработки
[10, 23, 59, 60].
Перед исследованием отбирали необходимое количество рабочего раствора
люминола из расчета 2 мл на одну пробу и нагревали в термостате до 37
°С. Предварительно разливали по 2 мл раствора в стаканчики для измерения
хемилюминесценции, которые также помещали в термостат. В 2 мл теплого
раствора люминола добавляли 0,1 мл гепаринизированной крови, тщательно
перемешивали и помещали в кюветную камеру прибора, настроенного по
программе КРОВЬ (термостат включен, мешалка выключена, время измерения
10 минут).
2.3. Статистическая обработка результатов исследования
Данные представлены в виде медианы и интерквартильного размаха от 25
(low quartile) до 75 квартиля ( high quartile) [40].
Сравнение между группами было выполнено с использованием теста Манна –
Уитни, при сравнении более 2 групп применялся тест Крускала – Уоллиса.
Для сравнения относительных величин применялся критерий чІ. Для
исследования корреляционных взаимодействий выполнялся корреляционный
анализ Спирмена.
Различия считались статистически значимыми при р
Нашли опечатку? Выделите и нажмите CTRL+Enter
