содержание
стр.
Список сокращений
введение
1. обзор литературы
1.1. Использование Ti-плазмид агробактерий в генетической инженерии
1.1.1. Краткая характеристика Agrobacterium tumefaciens
1.1.2. Cоздание векторов на основе Ti-плазмид
1.1.3. Процессинг тДНК в бактериальной клетке
и ее перенос в клетки растений
1.1.4. Разработка система трансформаций растений с
помощью Agrobacterium tumefaciens
1.1.5. Проблема сохранения чужеродных генов,
перенесенных в растение
1.1.6. Анализ экспрессии чужеродных генов в трансформированных
растениях
1.2. Использование метода генетической
инженерии для трансформации однодольных растений
1.2.1. Краткие характеристики ряски
1.3. Сигнальные молекулы, их способность индуцировать процессинг тДНК
2. Материалы и методы
2.1. Материалы
2.1.1. Оборудование
2.1.2. Бактериальные штаммы и плазмиды
2.1.3. Растения
2.1.4. Среды микробиологические для
культивирования растений
2.1.5. Другие растворы
2.1.6. Ферменты, используемые в генной инженерии
2.1.7. Антибиотики
2.2. Методы
2.2.1. Инкубация Agrobacterium tumefaciens с
экссудатами тканей растений
2.2.2. Выделение тотальной ДНК Agrobacterium tumefaciens
2.2.3. Блод-гибридизация тДНК по Саузерну
2.2.4. Трансформация клеток Esherichia coli
3. результаты
4. обсуждение
5. выводы
Список литературы
приложение
СПИСОК СОкРАЩЕНИЙ
НУК – нафтиуксусная кислота
БАП – бензиламинопурин
MS –
LB –
тДНК –
Ар – ампицилин
Cs – цефотоксин
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность работы:
Свойство бактерий вида Agrobacterium tumefaciens вызывать у растений
корончато-галловую болезнь связано с присутствием в их клетках крупных
(95-156 мДа) конъюгированных Ti-плазмид (от англ. tumor-inducing –
вызывающий опухоль). В процессе идентифицирования растений часть
генетического материала Ti-плазмид – тДНК (от англ. transeferred DNA –
передаваемая) перемещается в растительные клетки и интегрируется в
хромосомы, оставаясь частью наследственного материала. Гены тДНК
экспрессируются в трансформарованных растительных клетках, нарушают их
фитогормональный балланс и определяют синтез специфических ——-
соединений.
Таким образом, агробактерии являются природными “генными инженерами”,
осуществляющий поразительный по филогенетической дальности перенос
генетической информации. На основе агробактерий сконструированы
эффективные векторные системы для генетической инженерии растений.
Агробактириальная трансформация происходит в результате сложного
процесса взаимодействия между бактериальными и растительными клетками. В
этом процессе одной из решающих стадий является рецепция агробактериями
особых сигнальных молекул, присутствующих в акссудатах поврежденных
тканей растений. Сигнальные молекулы индуцируют экспрессию генов области
vir (агробактериальных Ti-плазмид), контролирующих вырезание тДНК и ее
перенос в клетки растений. Агробактерильная трансформация наблюдается у
широкого круга голосеменных и двудольных растений, однако, она отмечена
лишь у весьма незначительного числа однодольных растений. Одной из
причин ограничений агробактериальной трансформации однодольных считается
присутствие в их клетках сигнальных молекул, индуцирующих процессинг и
перенос тДНК.
Цель работы:
В настоящее время имеются противоречивые данные относительно наличия
таких сигнальных молекул у однодольных растений. В связи с этим, целью
данной работы был анализ ряски на присутствие у них сигнальных молекул,
индуцирующих процессинг тДНК.
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Использование Ti-плазмид агробактерий в генетической инженерии
растений
1.1.1. Краткая характеристика Agrobacterium tumefaciens
За последнее десятилетие в области генетической инженерии растений
достигнуты значительные успехи. Были разработаны разнообразные методы
генетической трансформации и, в настоящее время осуществлена экспрессия
чужеродных генов в растениях многих видов. Наиболее важным для развития
генетической инженерии растений было открытие молекулярных основ
опухолевых образований с помощью Agrobacterium tumefaciens [7].
Вирулентные штаммы Agrobacterium tumefaciens (сем. Rirobiaceae)
характеризуются присутствием в клетках большой плазмиды, так называемой
Ti-плазмиды, весом более 150 т.п.н. (см. Приложение) [9].
Агробактерии вызывают опухолевый рост у многих двудольных и
голосеменных, а так же у некоторых однодольных растений [2,3]. Для
инфицирования in vivo необходимо повреждение тканей растения [12].
После прикрепления к клеточной стенке растительной клетки агробактерии
переносят часть Ti-плазмиды (так называемой тДНК) в ядро, где происходит
ее стабильная интеграция в хромосому растения.
Доказано, что функция распознавания клеток и прикрепления к ним, а так
же вырезание, перенос и, возможно, интеграция тДНК в растительный геном
кодируется двумя хромосомными генами – Chva и Chvb [13] и рядом генов
vir-области, находящихся на Ti-плазмиде [14].
После переноса в ядро растительной клетки, тДНК может интегрировать в
геном в виде одной или нескольких копий [15]. Встроенная тДНК имеет
свойства, характерные для ДНК эукариот, что показано в экспериментах по
гиперчувствительности к ДНК-азе I (Schafer, 1984). В зависимости от типа
Ti-плазмиды, в тДНК находится от семи до тринадцати генов, ответственных
за опухолевый фенотип. Гены 1 и 2 кодируют ферменты, участвующие в
синтезе ауксина, индолилуксусной кислоты, в то время, как ген 4 кодирует
изопентенилтрансферазу, синтезирующую цитокинин изопентенила денозин
5′-монофосфат [16].
Одновременная транскрипция генов 1,2 и 4 приводит к повышению уровня
фитогормонов внутри трансформированных клеток. Результатом этого
является повышение митотической активности и образование опухоли. Другие
гены тДНК кодируют синтез так называемых опинов, из которых наиболее
изучены нопапин и октопин. Опины представляет собой производное
аминокислот и сахаров, которые служат источником питания для
агробактерий [14]. В целом, образование корончатого галла представляет
собой хорошо охарактеризованный пример генетической инженерии растений в
природе.
Мутации в вирулентных генах агробактерий. Наличие Ti-плазмид в клетках
агробактерий является абсолютно необходимым условием патогенности
микроорганизма. Излеченные от Ti-плазмид штаммы агробактерий
авирулентны. На вирулентность Agrobacterium tumefaciens оказывают
влияние различные мутации, картируемые как на опухолевых плазмидах, так
и на хромосомах. Ранние этапы взаимодействия агробактерий с растениями,
так же как хемотаксис, прикрепление к поверхности растительной клетки и
специфическое связывание в центрах инферкции контролируются генами,
имеющими хромосомную локализацию. В хромосоме расположены некоторые
гены, регулирующие экспрессию vir-генов Ti-плазмид [19]. Присоединение
агробактерий к клеткам растения является одним из первых этапов,
определяющих эффективное взаимодействие. Этот этап у Agrobacterium
tumefaciens контролируют два связанных между собой хромосомных локуса
Chva и Chvb, размерами 1,5 kb и 5kb, соответственно [Дуглас и др, 1985].
Гены этих локусов экспрессируются конститутивно. В результате
транспозонного мутагенеза этих областей получают авирулентные или
дефекнтые по прикреплению агробактерии. Мутации в этих локусах сильно
понижают или ингибируют вирулентность бактерии, но не для всех хозяев.
Локус Chvb определяет синтез нейтрального циклического (-D-гликана,
который трансформируется в периплазматическое пространство клетки с
помощью продукта гена Chva. Роль нейтрального (-D-гликана в инфекционном
процессе еще точно не установлена. Помимо циклического (-D-гликана в
прикреплении патогенных агробактерий к растительным клеткам принимают
участие и другие полисахариды, в частности внеклеточные
экзополисахариды.
Организация vir-генов Ti-плазмид. Вирулентные гены агробактерий на Ti-
и Ri-плазмидах кластеризованы в области vir разметом около 30-35 kb,
проявляющей в этих плазмидах значительную гомологию ДНК. Выявлена также
гомология vir-генов Ti-плазмид Agrobacterium tumefaciens с tra-генами
конъюгитивных плазмид. В —– Ti-плазмидах в области vir локализовано
шесть различных групп комплементации A, B, C, D, E и G, организованных в
единый регулон [Stachel Nester, 1986]. Октопиновая Ti-плазмида Arh 5
имеет дополнительный локус vir F, расположенный справа от локуса vir E
[Kooykaas et al., 1984]. Мутации в генах и ——— vir A, vir G, vir B
и vir D придают агробактериям авирулентный фенотип, в отличие от
большинства хромосомных мутаций, имеющих круг трансформируемых
растений-хозяев.
Продукты генов vir-области контролируют процессинг тДНК в бактериальной
клетке, ее перенос в растительную клетку и интеграцию в ядерный геном
растения, причем эти процессы гены vir могут определять не только в цис,
но и в транс положении по отношению к тДНК (то есть находясь в разных
репликонах). Исходя из этого свойства области vir, сконструированы и
успешно используются в практике удобные бинарные векторы для
генетической инженерии растений [Дрейпер с соавт, 1991]. Для процессов
“вырезания” тДНК из плазмиды (точнее, высвобождения в процессе
репликативного синтеза) и ее переноса в растение необходимо
фланкирование этой области особыми границами: несовершенными прямыми
повторяющимися последовательностями ДНК размером 24 —- , проявляющими
значительную гомологию у всех изученных Ti- и Ri-плазмид. Границы тДНК
гомологичны области oriT конъюгативных плазмид. В этой области
сайт-специфические эндонуклеазы производят одноцепочечный разрыв,
служащий началом репликации по типу разматывающегося рулона,
происходящей в процессе транспорта плазмиды. Репликация обеспечивает
сохранение плазмиды в материнской клетке и появление ее копии в
дочерней.
Для нормального процессинга тДНК и ее переноса в растительную клетку
особенно важна ее правая граница, которая одна может определять
полярность переноса тДНК. Удаление правой границы из Ti-плазмид делает
агробактерии полностью авирулентными. Замена ее на искусственно
синтезированную, так же как и на левую, восстанавливает вирулентность
микроорганизма.
На процессинг тДНК в клетках бактерий влияют мутации в генах vir D, vir
C и vir E – оперонов, на транспорт т-комплекса в растительную клетку –
мутации в генах vir B и vir D – оперонов.
1.1.2. Создание векторов на основе Ti-плазмид
В начале восьмидесятых годов были сделаны первые попытки перенести
чужеродные последовательности ДНК в растительные клетки либо с помощью
транспозонного мутагенеза [Uernals-teens et al., 1980], либо путем
сайт-специфической миграции генов в тДНК и последующей двойной
рекомбинацией с Ti-плазмидой дикого типа [Matrke et al., 1981; leemans
et al., 1981]. Однако, эти ранние эксперименты, основанные на двойной
рекомбинации, занимали много времени, были довольно сложны и
трансформации проходили с очень низкой частотой. Необходимо было
разработать более эффективные векторы, чтобы облегчить генетические
манипуляции с бактериями и позволить селекцию и регенерацию
трансформатов.
Сейчас используют две принципиально разные системы для введения
чужеродных генов в растения с помощью Ti-плазмид:
—- векторы
бинарные векторы.
В основе создания ——– векторов лежит тот факт, что гены тДНК не
——- для растительных клеток, и любая последовтельность ДНК,
встроенная между границами тДНК, может интегрировать в хромосому
растительной клетки и нормально там экспрессироваться [Zambryski et al.,
1983]. В ——– векторых системах тДНК можно заменить, например, на
последовательность pBR322, а чужеродную ДНК, которую предполагается
перенести в растения, нужно проклонировать в этом же векторе.
Затем путем гомологичной рекомбинации эта чужеродная ДНК может быть
перенесена на Ti-плазмиду реципиентного штамма агробактерии (рис. 2).
Одним из первых таких векторов на основании Ti-плазмид авляется pGV3850
[Zambryski et al., 1983]. В нем все гены, ответственные за синтез
фитогормонов, были заменены на последовательность pBR322.
ДНК pBR322 обеспечивала гомологию для ——- области тДНК pGV3850 с
любыми производыми pBR, несущими клонированный ген.
Гены, кодирующие различные маркерные белки для быстрого отбора
трансгенных растений, были встроены в pGV3850 [De Blocle, 1984]. Была
разработана система трехродительного скрещивания для переноса любых
производных pBR322 из E. coli в A. tumefaciens pGV3850 [Van Haute et
al., 1983]. В настоящее время сконструированы и успешно используются и
другие — ———- векторы на основе Ti-плазмид [Royers et al.,
1988].
Рис. 2.
Схемы ——– (А) и бинарной (Б) векторных систем. vir – область
вирулентности. HOM – области гомологии, в пределах которых может
происходить рекомбинация, приводящая к образованию коинтегратов. LB и RB
– левая и правая границы тДНК. MCS – —– сайт для клонирования. РТМ –
маркет трансформации для растений. RES – маркер устойчивости к
антибиотику для бактерий. OriT – начало переноса и bom-сайт для
мобилизации векторов при конъюгации. Col E1 – начало репликации из
плазмиды Col E1. RK2 – начало репликации из плазмиды широкого круга
хозяев RK2.
Система бинарных векторов основана на том, что область тДНК и гены vir
могут распологаться на разных плазмидах [Hockemu et al., 1983]. В таких
системах обычно присутствуют два элемента:
Ti-плазмида-помощник, в которой тДНК польностью делетирована. Эта
плазмида несет в своем составе гены vir, действующие in trans.
Плазмида широкого круга хозяев, имеющая сайты для клонирования и
маркерные гены для селекции растений, ограниченные правой и левой
фланкирующими последовательностями тДНК [An et al., 1988] рис
Обе описанные выше системы векторов предполагают ——— этапах сборку
нужных конструкций в промежуточных векторах, например в pAP2034
[Veltena, Sehell., 1987] или pRT103 [Topter et al., 1983] а затем
перенос из в готовом виде в рецепиентные штаммы агробактерий.
1.1.3. Процессинг тДНК в бактериальной клетке
и ее перенос в клетки растений
Формы процессированной тДНК. При культивировании Agrobacterium
tumefaciens с механически поврежденными частями растений,
регенерирующими протопластами или в присутствии ——— из клеток
бактерий можно выделить различные молекулярные формы процессированной
тДНК – одноцепочечные линейные, двуцепочечные линейные и двуцепочечные
кольцевые, которые могут претендовать на роль посредника в переносе
генетического материала в растительную клетку [——-, 1980]. Причем
кольцевая форма, образующаяся за счет гомологичной рекомбинации между
правой и левой границей тДНК с образованием одной гибридной границы,
встречается в очень малых количествах. При ее образовании не происходит
репликативного синтеза ДНК, в то время как в случае образования двух
других форм, возможно прохождение репликации тДНК в бактериах в процессе
ее транспотра в растения (к появлению одноцепочечных форм может
приводить прерывание, ингибирование прерывистого синтеза запаздывающей
цепи). Репликация призвана обеспечить сохранение тДНК в исходной
Ti-плазмиде, если только не допустить возможность существования
физического вырезания материала тДНК из Ti-плазмид за счет образования
двухцепочечных разрывов в границах. Исчезновение тДНК из Ti-плазмид
является главным недостатком отошедшей на второй план подобной
“эксцезионной модели”. Тем не менее, образование двуцепочечных разрывов
внутри границ и появление детектируемых количеств линейной двуцепочечной
формы тДНК при культивировании бактериальных клеток в присутствии
———- исследователи наблюдали уже через 30 минут после добавления
этого индуктора в среду. Так же в условиях индукции vir-генов ———
в клетках агробактерий обнаруживается линейная одноцепочечная форма
процессированной тДНК [Stachel et al., 1986].
Появление этого интермедиата обнаруживается через восемь часов после
добавления индуктора, и его количество накапливается на протяжении
последующих 40 часов более, чем в два раза, а затем идет на убыль,
показывая, что процесс лимитирован.
Какая из форм транслоцируется через бактериальную мембрану в
бактериальную клетку до сих пор остается не выясненным из-за трудности
определения относительного количества каждой из форм и выявления
динамики их превращения. Возможно, процессинг и транспорт тДНК не
разобщены во времени и идут сопряженно подобно конъюгационному переносу
плазмид, происходящему в месте контакта мембран конъюгирующих клеток
[Clark and Warren, 1979]. Тогда все обнаруживаемые интермедиаты могут
быть аберрантными формами прерванного на каком-то этапе неделимого
процесса (или неправильно завершенного). В случае индуцированной
экспрессии vir-генов ——- отсутствует главный элемент взаимодействия
– контакт бактериальной клетки и растительной клетки, и, поэтому, все
обнаруживаемые в этом случае формы могут претендовать на роль посредника
лишь с определенными допущениями. Достоверно известно, что в
растительную клетку попадает только одна цепь тДНК и конвертируется в
двуцепочечную уже в растительной клетке. Обсуждается, что в случае
прохождения в клетке Agrobacterium tumefaciens ——–
полуконсервативной репликации тДНК вторая цепь может в процессе переноса
гидролизоваться, высвобождая энергию для транспорта переносимой цепи.
1.1.4. Разработка система трансформаций растений с
помощью Agrobacterium tumefaciens
Большинство первоначальных экспериметнов по генетической трансформации
растений было предпринято с помощью заражения пораненных растительных
клеток с помощью агробактерий с немодифицированными Ti-плазмидами. Для
сохранения стерильности часто инфицировали эксплантаты in vitro вместо
целых растений. Бактерии затем удаляли, добавляли в среду цефотоксин или
карбенициллин. Трансформанты отбирали на безгормональной среде.
В дальнейшем по мере создания обезоруженных векторов и новых селективных
маркеров, был разработан более эффективный метод, дающий большое число
трансформантов: кокультивирование агробактерий с растительными
протопластами либо с эксплантантами листьев. Было показано, что
кокультивирование протопластов с агробактериями, либо с бактериальными
——–, приводит к образованию опухоли [Marton et al., 1979, Wullems
et al., 1981]. Затем подобный подход был успешно применен для
трансформации растительных клеток агробактериями, несущими в составе
тДНК химерные селективные маркеры [Fraley et al., 1983, Herrera-Estrella
et al., 1983].
Этот метод был в дальнейшем улучшен использованием так называемых
фидерных культур [Fraley et al., 1983]. Однако, все перечисленные методы
пригодны только для трансформации растений, которые можно легко
регенерировать из протопластов (например, табак и петуния). Эту проблему
мрожно легко преодолеть кокультивируя агробактерии с листовыми дисками
вместо протопластов [Horch et al., 1985; Rogers et al., 1986; Lloyd et
al., 1986]. Стерильные листовые диски ——— с агробактериями,
несущими в составе обезоруженного вектора какой-либо селективный маркер
устойчивости к антибиотику. Затем кусочки листьев культивируют два дня
на фидерных чашках со средой для образования побегов. После этого их
переносят на среду с цефотоксином для уничтожения бактерий и с
каким-либо антибиотиком (например, с ———) для отбора
трансформантов. Регенерировавшие побеги дают корни, после чего растения
переносят в почву для проведения дальнейших экспериментов.
Поскольку метод трансформации листовых дисков представляет собой
идеальное сочетание высокой частоты трансформации с легкой и быстрой
——- и регенерацией трансформантов, этот подход стали использовать во
многих лабораториях мира. Кроме того были предложены некоторые
модификации метода. Для повышения частоты трансформации листовых дисков
Arabiodopsis было предложено обрабатывать агробактерии ———
[Sheikholeskam a. Week S, 1987], который является индуктором генов vir
[Stachel et al., 1985]. Однако метод трансформации листовых дисков
применим для трансформации только тех видов растений, которые могут
регенерировать побеги из недифференцированных клеток в месте поранения.
Наряду с методом трансформации листовых дисков широко используются
конъюгированные агробактерии со стеблевыми сегментами [An et al., 1986],
клетками суспензированной культуры [Scott a. Draper, 1987],
микрокаллусами [Pollock et al, 1985] и прорастающими семенами [Feldmam
a. Markis, 1987]. Метод трансформации семян агробактериями был впервые
применен для арабидопсиса и заслуживает особого внимания, так как не
требует работы с культурой ткани.
1.1.5. Проблема сохранения чужеродных генов, перенесенных в растение
Чужеродные ДНК, перенесенные в растительные клетки с помощью различных
методов, обычно встраиваются в ядерный геном и наследуются в
соответствии с законами Менделя [De Block et al., 1984; Horsch et al.,
1984]. Области ингерации, по видимому, распределены случайным образом
по геному. Встраивание генов по определенным сайтам было ранее описано в
системах животных клеток [Smithies et al., 1985; Maniatis, 1985] и
недавно подобный подход был успешно применен для трансформации растений
[Paszkowski et al., 1988].
В большинстве случаев последовательности чужеродной ДНК встраиваются в
один локус либо в одной копии, либо в виде кластера тандемных вставок,
что было показано с помощью гибридизации in situ [Mouras et al., 1986].
Однако, часто наблюдаются множественные вставки в два или более участков
на разных хромосомах [De Block et al., 1984; Peerbolte et al., 1986a, b;
Feldmann a. Marus, 1987]. В связи с этим во многих случах была получена
контрансформация физически несцепленных генов, сегрегация некоторых
проходила в поколении F1 [De Framond et al., 1986; Simpson et al.,
1986].
Чужеродыне гены обычно передаются потомству с высокой степенью
стабильности при мейозе [Muller et al., 1987]. Однако, иногда наблюдали
случайную потерю трансформированного фенотипа после мейоза [Potrykus et
al., 1989].
Возмножно, это происходило из-за активации чужеродного гена (например,
при метилировании ДНК). Интеграция чужеродной ДНК во внеядерные геномы,
например, в хлоропластную ДНК [De Block et al., 1980], так же происходит
по неменделевскому типу наследования – по материнской линии.
Используя метод гибридизации по Саузерну [Southern, 1975] для анализа
трансформантов и их потомства, многие исследователи показали, что часто
наблюдается встраивание укороченных, тандемных или перестроенных копий
чужеродных генов, особенно после прямого переноса ДНК в протопласты
[Krens et al., 1985]. Появление тандемов, часто от 5 до 20 копий, можно
объяснить рядом рекомбинаций перед интеграцией в геном [Szernilofsky et
al., 1986; Wirtz et al., 1987]. Образование инвертированных повторов
является основным типом перестроек чужеродной ДНК при применении
векторов, содержащих тДНК —– Ti-плазмиды [Jorgensen et al., 1987].
Итак, при проведении опытов по трансформации растений, необходимо
принимать во внимание тот факт, что чужеродная ДНК может подвергаться
различным модификациям перед встраиванием в геном хозяина. Однако, и
после интеграции могут происходить различные ее перестройки, обычно во
время мейоза [Czernilofsky et al., 1986]. В таких случаях только
перекрестное опыление тщательно отобранных трансформантов с наиболее
желаемым генотипом и фенотипом дает потомство с предсказуемыми
призанаками.
1.1.6. Анализ экспрессии чужеродных генов в трансформированных растениях
Для качественного и количественного анализа экспрессии чужеродных генов
в растениях используют множество методов, включая Нозери-анализ РНК
[Nagy et al., 1988] и Вестери-анализ продуктов трансдукции [Burnette,
1981]. Кроме того, изучают фенотипические признаки такие как,
устойчивость к антибиотикам и гербицидам. Для анализа экспрессии таких
репортерных генов, как cat, npt II, гены октопин- и ——– разработаны
чувствительные методы [Otten a. Schilperoort, 1987; Gorman et al.,
1982].
Такого рода анализ может иметь большое значение, поскольку можно
комбинировать кодирующие последовательности репортерных генов с
подходящими регуляторными последовательностями растительных генов, либо
создавать двойные гены, экспрессирующиеся с одного и того же промотора.
Активность гена и промотора можно таким образом определить либо с
помощью ферментативного анализа, либо гибридизацией растительной РНК с
зондами, комплементарными репортерному гену.
Перечисленные выше разнообразные методики можно успешно применять для
анализа экспрессии чужеродных генов в трансгенных растениях, в
частности, генов устойчивости к гербицидам, насекомым, облучению,
антибиотикам и др.
1.2. Использование метода генетической
инженерии для трансформации однодольных растений
1.2.1. Краткие характеристики ряски
——————
1.3. Сигнальные молекулы, их способность индуцировать процессинг тДНК
Экспрессию генов vir-области индуцируют специфические сигнальные
молекулы посредством позитивной регуляции системы в состав которой
входят гены virA и virG [Melchers et al., 1986; Stackel, Zambryski,
1986].
Активаторами транскрипции vir-генов являются низкомолекулярные
моноциклические фенольные соединения, синтезируемые в механически
поврежденных тканях растений [Stuchel, 1985]. Примерами таких соединений
являются ———– и довольно широкий круг производных ——-
биосинтетического пути метаболитов защитной природы или предшественников
лигнина.
Сигнальные молекулы были впервые обнаружены в экссудатах корней и
листьев двудольного растения Nicotiano tabacum, они были
идентифицированы как —– и ——-. Эти соединения синтезировали
метаболически активные поврежденные ткани растений. В настоящее время
установлена сигнальная индуцирующая активность у большой группы ——-
соединений растительной природы. Механическое повреждение тканей
растений приводит к усилению синтеза таких сигнальных соединений.
Известно, что ———— и коричная кислоты, проявляющие сигнальную
активность, обладают так же антимикробными свойствами и являются
промежуточными метаболитами на пути синтеза ——-.
Нашли опечатку? Выделите и нажмите CTRL+Enter
