.

Генотоксические эффекты у детей – подростков из Чебулинского района Кемеровской области

Язык: русский
Формат: дипломна
Тип документа: Word Doc
73 1443
Скачать документ

http://monax.ru/order/ – рефераты на заказ (более 2300 авторов в 450
городах СНГ).

МИНИСТЕРСТВО ОБЩЕГО И ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО

ОБРАЗОВАНИЯ РФ

КЕМЕРОВСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ

КАФЕДРА ФИЗИОЛОГИИ ЧЕЛОВЕКА И ЖИВОТНЫХ И ВАЛЕОЛОГИИ

Крюкова Ольга Сергеевна

Генотоксические эффекты у детей – подростков

из Чебулинского района Кемеровской области

ДИПЛОМНАЯ РАБОТА

Научный руководитель :

к.б.н.,
доцент Дружинин В.Г.

Работа допущена к защите Работа защищена

«___» ______ 2001г. «___»
______ 2001г

Зав. Кафедрой ______ с
оценкой

Члены ГАК _____________

Кемерово – 2001

ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ . . . . . . . . 3

ГЛАВА 1. Обзор литературы. Хромосомный мутагенез и

факторы его вызывающие . . . . . . 6

1.1. Хромосомы человека и основные типы структурных

мутаций хромосом . . . . . . . 6

1.1.1. Денверская система классификации хромосом . . 7

1.1.2. Основные типы хромосомных перестроек . . . 10

1.1.3. Механизмы возникновения хромосомных перестроек . 15

1.1.4. Принципы учета хромосомных аберраций на стадии

метафазы и общие рекомендации к нему . . . . 20

1.2. Спонтанный хромосомный мутагенез . . . . 24

1.3. Специфичность и особенности химического мутагенеза 25

ГЛАВА II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ . . . . 29

2.1. Характеристика обследованных групп . . . . 29

2.2. Культивирование крови, приготовление препаратов

хромосом и анализ цитогенетических нарушений . . 30

ГЛАВА III. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ . . . 32

ВЫВОДЫ . . . . . . . . . 38

ЛИТЕРАТУРА . . . . . . . . 39

ВВЕДЕНИЕ

Прогресс генетики человека, как и любой другой фундаментальной
медико-биологической дисциплины, может в ближайшем будущем существенно
расширить подходы и методы решения задач практической педиатрии и,
прежде всего, вопросов профилактики не только наследственных
заболеваний, но и различных форм патологии мультифакториального генеза
[Бочков, 1995].

Проблема донозологической диагностики заболеваний (или риска их
возникновения) имеет особую значимость для промышленных регионов, где
неблагоприятному техногенному воздействию подвержены большие группы
населения, в том числе – детского. Данные эпидемиологических и
экологических исследований однозначно показывают, что к числу таких
регионов относится территория Кемеровской области, причем
неблагоприятному воздействию загрязнителей окружающей среды подвергаются
не только жители промышленных городов, но и население
сельскохозяйственных районов.

Известно, что в человеческой популяции существует широкий наследственный
полиморфизм порога резистентности к токсическому воздействию факторов
среды. Это выражается в дифференциации риска возникновения патологии у
разных людей, проживающих в сходных экологических условиях. Так как
в сложившихся социально-экономических условиях сложно представить
возможность быстрого и коренного улучшения экологических параметров
среды, то следует искать иные пути решения проблемы профилактики
заболеваемости и прежде всего для тех форм, которые этиологически

связаны с воздействием токсических факторов. В этой связи, изучение
адаптивных возможностей организма человека в условиях интенсивного
загрязнения среды обитания следует проводить на всех уровнях
организации: популяционном, организменном, клеточном и молекулярном.
Для каждого из этих уровней характерны собственные методические подходы;
в частности, клеточный уровень предполагает использование
цитогенетического метода, позволяющего выявить степень напряжения
генетических систем и, следовательно, оценивать адаптивные резервы на
клеточном уровне. Кроме того, цитогенетический метод позволяет
экспертировать качество окружающей среды в части загрязнения ее
мутагенными факторами химического и лучевого происхождения.

Анализ индивидуальной резистентности к мутагенному воздействию
позволяет выявить людей, имеющих повышенный риск возникновения
заболеваний различной этиологии. Следует отметить, что отсутствие к
настоящему времени научно обоснованной схемы рекомендаций для лиц,
относящихся к группам высокого токсико-генетического риска затрудняет
использование данных цитогенетического контроля в практической
медицине. Вместе с тем, создание, апробация и внедрение такой схемы
имеет важное значение, т.к. позволит проводить реальные профилактические
и реабилитационные мероприятия в тех случаях, где это действительно
необходимо.

На протяжении ряда лет в лаборатории генетики кемеровского
государственного университета проводится мониторинг генотоксических
эффектов, наблюдаемых в группах детского и подросткового населения
Кемеровской области. Представленная дипломная работа включает в себя
результаты цитогенетического обследования подростков, проживающих на
территории одного из сельскохозяйственных районов области –
Чебулинского, осуществленного в рамках этого мониторинга.

Цель работы: изучить степень и характер генотоксического воздействия
факторов среды на подростков, проживающих в Чебулинском районе
Кемеровской области.

В соответствии с целью в работе решались конкретные задачи:

1, Оценить частоту и качественный спектр хромосомных мутаций в
лимфоцитах крови девочек-подростков – жителей сел Усманка и Дмитриевка
Чебулинского района.

2. Сопоставить собственные результаты цитогенетического анализа с
данными цитогенетического мониторинга подростков пос. Крапивинский
Кемеровской области.

3. Оценить вероятные источники загрязнения окружающей среды
генотоксическими агентами на территории Чебулинского района.

ГЛАВА 1. Обзор литературы. Хромосомный мутагенез и факторы его
вызывающие.

1.1. Хромосомы человека и основные типы структурных мутаций человека.

Использование культуры лейкоцитов для изучения хромосом человека начато
работами Г.К. Хрущева и соавт. (1931), А.Г. Андерса и М.С. Навашина
(1936). Хсу (Hsu, 1952) и Хьюгес (Hughes, 1952) независимо предложили
использование гипотонического раствора для обеспечения разбрасывания
хромосом, т.е. их отделение друг от друга в метафазах. Использование
гипотонического раствора совместно с колхицином (Hsu, Pomerat, 1953)
дало возможность получать и накапливать хорошие метафазные пластинки.
Благодаря анализу хромосом клеток из культуры фибробластов было
показано, что число хромосом у человека равно 46 (Tjio, Levan,1956;
Ford, Hamerton, 1956).

Современная цитогенетика в первую очередь опирается на изучение хромосом
в лейкоцитах человека. Культура лимфоцитов обладает целым рядом
преимуществ по сравнению с другими объектами, используемыми в
тест-системах. Большим достоинством исследований по структурной
изменчивости хромосом в культуре лейкоцитов человека является
возможность не только качественного, но и количественного учета, что
обеспечивает наглядную четность выводов и объективности результатов
анализа. Лейкоциты крови нормальных людей в культуре, в основном
свободные от структурных мутаций, подвергаются различным
экспериментальным обработкам для выяснения характера и степени
мутагенности того или иного воздействия. Вместе с тем кровь может быть
взята у людей, которые подвергались в то или иное время воздействию
мутагенных факторов. В этом случае, регистрирую характер и число
мутаций, можно вскрыть последствия от таких воздействий, изучая
структурные мутации хромосом в метафазах (Дубинина, 1977).

В исследованиях по цитогенетике человека было показано, что основные
закономерности индуцированного мутагенеза хромосом, качественная
характеристика типов структурных изменений и особенности их проявления
по разным фазам клеточного цикла в принципе одинаковы с ранее изученным
индуцированным мутагенезом в клетках растений и животных. Тоже касается
и спонтанного мутагенеза. Для учета структурных мутаций хромосом
необходимо знание кариотипа соматических клеток человека и всех основных
категорий структурных мутаций хромосом.

1.1.1. Денверская система классификации хромосом.

Обычно классификация хромосом строиться на учете размера каждой из
хромосом в кариотипе, по положению центромеры и по другим особенностям.
Решениями конференций по хромосомам человека в Денвере США (Denver
conference, 1960), в Лондоне (London conference, 1966) сведены обширные
материалы из многочисленных литературных источников в систему, имеющую в
настоящее время общепризнанный характер. Согласно этой системе, 22 пары
аутосом были перенумерованы от 1 до 22-й номере уменьшения их длинны,
пара половых хромосом обозначена символами Х и У. Кариотип мужчины – ХУ,
женщины – ХХ. 22 пары аутосом разделены на семь групп, обозначаемых
буквами от А до G. Каждая группа хромосом характеризуется следующими
особенностями (рис 1):

Группа А содержит 3 пары длинных хромосом (1-3), каждую из которых можно
легко индивидуализировать. Хромосомы 1,3 являются метацентриками,
аромосома 2 – субметацентрична;

Группа В содержит две пары хромосом (4-5). Они короче хромосом из группы
А и являются субметацентриками;

Группа С содержит 6 пар аутосом (6-12), все хромосомы с субмедиальным
расположением центромеры, средних размеров, их трудно
индивидуализировать. К этой группе по размеру относится Х-хромосома,
которая отличается тем, что заканчивает синтез ДНК позднее других;

Группа D содержит 3 пары хромосом (13-15). Хромосомы средних размеров
имеют почти терминальное расположение центромеры – акроцентрики. Все они
имеют спутники, морфологически похожи;

Группа Е состоит из 3 пар коротких хромосом (16-18). Хромосомы 16-й пары
являются метацентриками. Хромосомы 17-й и 18-й пары, похожи между собой
и являются субметацентриками;

Группа F имеет 2 пары коротких метацентрических хромосом (19-20),
которые неотличимы друг от друга;

Группа G состоит из 2-х пар хромосом (21-22). Это очень короткие
акроцентрические хромосомы со спутниками, трудно различимы, хотя
несколько отличаются по величине и морфологии. К ним примыкают
У-хромосома, которая несколько длиннее и имеет на длинном плече
вторичную перетяжку (Дубинина, 1977).

В настоящее время для более тонкой дифференциации каждой из хромосом
человека разработаны новые методы. Однако для исследования спонтанного
хромосомного мутагенеза достаточно применения методики рутинной окраски
хромосом, в результате которой все хромосомы перечисленных выше групп в
исследуемой метафазной пластинке равномерно окрашиваются и хорошо
идентифицируются.

1.1.2. Основные типы хромосомных перестроек.

Все хромосомные аберрации, возникающие в соматических клетках человека и
регистрируемые на стадии метафазы, разделяются на две основные группы:
аберрации храматидного типа и аберрации хромосомного типа. Согласно
наиболее распространенному мнению, аберрации хромосомного типа отражают
повреждение хромосомы в пресинтетической стадии (G1 – фаза), когда
хромосома реагирует как однонитчатая структура, тогда как аберрации
хроматидного типа возникают при повреждении хромосомы на стадии ее двух
нитей (фаза S и G2) (Buckton K., Evans H., 1973).

Аберрации хромосомного типа.

Исследования соматических клеток в метафазе показало, что цитологически
можно различить 7 видов хромосомных аберраций. Типы аберраций,
указанных на рисунке 2 в пунктах а – д, образуются в одной хромосомы и
могут быть названы внутрихромосомными обменами, а аберрации, указанные в
пунктах е и ж, сопровождаются обменом участками между различными
хромосомами и называются межхромосомными обменами.

а) Ацентрические фрагменты (терминальные делеции) представляют собой
спаренные хроматиды, которые располагаются параллельно друг другу, но не
имеют центромеры.

б) Малые фрагменты (интерстициальные, изодиаметрические делеции) –
спаренные хроматиды меньшего размера, чем ацентрические фрагменты,
имеющие характерный вид спаренных хроматиновых шариков.

в) Ацентрические кольца – спаренные хроматиды в форме кольца, не
содержащие центромеры. Различия между малыми фрагментами и кольцами
часто бывают произвольными, поскольку они основаны лишь на длине не
достигающего интерстициального участка хромосомы.

г) Центрические кольца – спаренные хроматиды в форме кольца, имеющие
центромеру.

д) Перецентрические инверсии – результат инверсии сегмента, содержащего
центромеру, с последующим его включением в ту же хромосому.

е) Симметрические межхромосомные обмены (реципроктные транслоказы) –
аберрации, возникающие в результате обмена между двумя хромосомами,
причин дистальные участки двух хромосом транслоцируются от одной к
другой.

ж) Асимметричные межхромосомные отмены (дицентрические, полицентрические
аберрации). Возникают в результате обмена между двумя или несколькими
хромосомами, происходящие таким образом, что проксимальные участки
хромосом соединяются, образуя дицентрическую или полицентрическую
структуру с сопутствующим ацентрическим пробелом.

Аберрации хроматидного типа.

Аберрации хроматидного типа представлены на рисунке 3. К ним относятся
хроматидные разрывы (фрагменты хроматид) и хроматидные обмены. Фрагменты
могут быть концевыми интерстициальными и точковыми. Если произошли
изохроматидный разрыв и поврежденные концы сестринских хроматид
соединились, то из-за притяжения сестринских хроматид на остальной части
они остаются лежать параллельно и потому имеют вид дуги. Хроматидные
фрагменты, малоудалённые от места повреждения, необходимо
дифференцировать от ахроматических пробелов, представляющих собой
неокрашенные участки хромосом (частки локальной деспирализации
хромосом). О фрагментах говорят в трех ситуациях:

1. Фрагмент сдвинут по длине. 2. Перевернут. 3. Сдвинут по оси.

Обмены хроматидного типа крайне многообразны. Они могут быть между
хроматидами одной хромосомы, двух и более хромосом. Кроме того,
различают полные и неполные, симметричные и ассиметричные обмены. Все
это создает возможность образование большого числа форм обменов. При
межхромосомных обменах образуются фигуры три-, квадри-, и
мультирадианов, или неправильных форм. Структура обменной аберрации
зависит от величины обмениваемых участков, гомологичности хромосом,
идентичности плеч, симметричности (эуцентричности) и полноты
(рецепроктности) обмена.

1.1.3. Механизмы возникновения хромосомных перестроек

Хромосомные перестройки – это обширный и гетерогенный класс
наследственных изменений, включающий выпадение (потери). Добавления
(удвоение, умножение) участков хромосом, а также их перемещения в
пределах одной хромосомы или между хромосомами.

Исторически эксперименты и теоретически построения по индуцированному
мутагенезу значительно опередили работы по выяснению природы
генетического материала хромосом. Однако после 1953, когда в работе Д.
Уотсона и Ф. Крика (D. Watson, F. Crick,1953) было сделано предположение
о структуре молекулы ДНК, о полуконсервативном характере об репликации и
о возможной молекулярной природе мутаций, открылась возможность для
конкретных исследований как характера повреждений в ДНК, индуцируемых
различными мутагенами, так и реальных механизмов репарации этих
повреждений. В монографии Н.П. Дубинина (1978) приведены сведения о
повреждениях ДНК различными мутагенами.

Обширный класс алкилирующих соединений может производить алкилирование
(присоединение метильной или этильной группы) в некоторых позициях к
азотистым основаниям (чаще всего к гуанину) или к фосфатным группам
полинуклиотидной нити. Алкилированные азотистые основания за счет
гидролиза выщепляются из цепочки ДНК, в следствии чего появляются
апуриновые или апиримидиновые сайты. В таких сайтах далее может идти
гидролиз нестабильных дезоксирибозидных остатков, и в результате
возникают однонитевые разрывы в ДНК. Разрывы могут быть и следствием
гидролиза после алкилирования фосфатных групп.

Бифункциональные алкилирующие соединения (серный и азотный
иприт,митомицин C) своими двумя алкильными группами могут алкилировать
сразу два гуанина из двух комплементарных нитей ДНК, образуя при этом
внутримолекулярную сшивку.

Такие сшивки – типичный результат воздействия на ДНК также азотистой
кислоты и ее солей.

Как видно, большинство первичных изменений в ДНК, вызываемых мутагенами,
сами по себе еще не мутации, т.е. не являются изменениями в
последовательности нуклеотидов. Эта последовательность может быть
изменена только после прохождения поврежденной молекулы через этап
репликации. Так, при репликации молекулы, в одну из нитей которой
встроена молекула акридинового красителя, против этой поврежденной нити
строиться комплементарная ей цепочка, содержащая лишний нуклеотид,
вставленный против места, где в поврежденной цепи интеркалирована
молекула акридина. Такая вставка нуклеотида, закрепляющаяся в обеих
нитях молекулы после еще одной репликации – это уже мутация,
обозначаемая как “сдвиг рамки считывания” (frame shift). Сшивки в
молекуле ДНК обычно летальны, т.к. не позволяют осуществлять нормальную
репликацию из-за невозможности расплетения нитей в месте сшивки.
(Смирнов В.Г. 1991).

Однако в работах Р. Кимбола (R. Kimball, 1966) указывалось, что клетка
способна к репарации повреждений в ДНК, вызванных действием мутагенов.

В большинстве случаев первичных повреждений после первой же репликации
(если они не были репарированны до репликации) напротив них во вновь
синтезированной нити ДНК появляется брешь. Ю.А. Митрофанов и Г.С.
Олимпиенко (1980) именно состояние такого разрыва в одной из
комплементарных нитей ДНК и считают потенциальным повреждением, которое
при одних условиях может быть репарировано, а при других – превращается
в двунитевый разрыв в молекуле ДНК (хроматидный разрыв).

A. Bender с соавторами ( Bender et al., 1973) считают, что при разрыве в
одной из нитей двунитевой молекулы ДНК неповрежденная нить может
разрезаться напротив разрыва ДНК-азой, специфичной для однонитевой ДНК.

Полагается, что такой механизм материализует идею резонансного
мутагенеза – перенося повреждения с поврежденной нити на неповрежденную.

По мнению Смирнова В.Г. (1991) обменные перестройки при воздействии
самыми разными мутагенами возникают благодаря одному и тому же
механизму, характеризующемуся воссоединением концов появляющихся
разрывов. Условием этого является тесная пространственная ассоциация
между участками хроматид одной хромосомы или разных хромосом. При
наличии такой ассоциации возникающие в хроматидах разрывы воссоединяются
подобно тому, как это происходит при кроссинговере (Беляев И.Я.,
Акифьев А.П., 1988).

Разные исследователи неоднократно обращали внимание на сходство между
процессом кроссинговера и образованием обменных перестроек при контакте
хроматид. Впервые такую мысль высказали А.С. Серебровский и Н.П. Дубинин
(1929), а затем “Обменную гипотезу” о механизме возникновения перестроек
предложил С. Ривелл (S. Revell, 1955, 1974). Результаты, полученные И.Я.
Беляевым и А.П. Акифьевым (1988), свидетельствуют о плодотворности
сопоставления этих двух процессов.

Ассоциации, между участками хроматид одной хромосомы или разных
хромосом, могут устанавливаться между районами хромосом, содержащими
высокоповторяющиеся последовательности ДНК. Такие последовательности
сосредоточены в гетерохроматиновых районах хромосом – в прицентромерном
и интерколярном структурном гетерохроматине. Именно для
гетерохромотиновых районов неоднократно описаны цитологически
наблюдаемые ассоциации не гомологичных хромосом.

Образование хромосомных аберраций возможно не только на основе
рекомбинации в районах локализации высокоповторяющихся не кодирующих
последовательностей ДНК, но и на основе рекомбинации между
повторяющимися генами, при наличии дубликаций в геноме.

Так же основой для возникновения хромосомных перестроек по
рекомбинационному механизму может быть присутствие в геноме
значительного числа копий различных мобильных элементов (Смирнов В.Г.
1991).

Вопрос о механизме возникновения хромосомных перестроек стал активно
обсуждаться сразу же после установления возможности индуцировать,
усилить мутационный процесс при воздействии такого возможного фактора,
как различные виды ионизирующих излучений (Г.А. Карсон, Г.С. Филиппов,
1925; Н. Миллер, 1927; L. Stadler, 1928).

А. Стадлер (L. Stadler, 1928) и М.С. Навашин (1931) считали, что
первичный эффект в действии Х-лучей на хромосомы – возникновение
разрывов. Это положение легко в основу широко известной гипотезы о
механизме возникновения индуцированных хромосомных перестроек, созданной
в работе К. Сакса (K. Sax, 1938-1942) и Д. Ли (D. Lea 1963, D.
Catcheside 1942). В зависимости от стадии клеточного цикла возникают
либо хромосомные (при облучении в период G1 до фазы S), либо хроматидные
(при облучении в фазах S и в начале G2) разрывы. Большая их часть затем
вновь воссоединяется с восстановлением исходной структуры (реституция).
Однако если разрывы в разных местах одной хромосомы (или хроматиды) или
в разных хромосомах (или хроматидах) в один и тот же момент
локализируется близко друг к другу, они могут воссоединится таким
образом, что возникают хромосомные или хроматидные делеции (нехватки),
транслокации, инверсии, вставки, образуются центромерные или
бесцентромерные кольцевые хромосомы, бесцентромерные фрагменты.
Отдельные фрагменты, появившиеся сразу в результате возникновения
разрывов, могут сохраняться как таковые и без воссоединения с
какими-либо другими.

Довольно скоро были получены убедительные данные о возможной модификации
мутагенного эффекта излучений благодаря действию дополнительных факторов
(температура, инфракрасный свет, понижение концентрации кислорода), из
которых каждый сам по себе не оказывал влияние на спонтанный уровень
мутационного процесса. Так в опытах К. Свенсона и А. Холлендера (C.
Swenson, A. Hollaender, 1946) было показано, что обработка микроспор
традесканции инфракрасным светом до или после облучения Х-лучами
приводит к значительному увеличению частоты как хроматидных делеций, так
и межхромосомных перестроек, причем в максимальной степени этот эффект
инфрактасных лучей был выражен при температуре 12 градусов С и
уменьшался при более низкой температуре.

Опыты такого рода заставили предположить, что ионизирующее излучение
вызывает не только разрывы хромосом, но и некоторые предмутационные,
потенциальные изменения в них, которые при дополнительном воздействии
слабее действующих факторов могут реализоваться в дополнительные разрывы
и перестройки (Смирнов А.Г. 1991).

1.1.4. Принципы учета хромосомных аберраций на стадии метафазы и общие
рекомендации к нему.

Окрашенные препараты начинают анализировать под небольшим увеличением
микроскопа, чем достигается общая оценка препарата, а именно
митотическая активность и наличие метафазных пластинок. Для анализа
хромосом требуется иммерсионный объектив.

При проведении метафазного анализа возможны два подхода к учету
хромосомных аберраций: с кариотипированием метафазной пластинки и без
кариотипирования. Первый подход наиболее точен, но он трудоемок и может
быть применен в специальных исследованиях (например, при изучении
распределения повреждений по группам хромосом, по длине отдельных
хромосом). Второй подход наиболее употребителен и дешев при быстром
решении вопроса (Priest, 1969). Так, например, при оценке мутагенности
факторов внешней среды достаточно учитывать хромосомные аберрации без
кариотипирования.

При анализе обмена наиболее полная информация включает ответы на
следующие вопросы:

1) число вовлеченных в обмен хромосом и хроматид;

2) симметричность транслокаций (эу – или анэуцентричность);

3) реципроктность (полнота);

4) гомологичность вовлеченных в обмен хромосом и их идентификация;

5) сравнительная величина участников при транслокации между
гомологичными хромосомами.

При анализе каждой аберрации необходимо помнить об одном факте:
гомологичные участки сестринских хроматид взаимно притягиваются
независимо от их перемещения.

Распознавание парных ацентрических фрагментов обычно не вызывает
затруднений. Они могут быть очень маленькими, еле заметными и очень
длинными палочнообразными структурами, лежащими, как правило,
параллельно друг другу за счет притяжения сестринских хроматид.
Полагают, что они представляют собой концевые делеции. Иногда можно
наблюдать очень длинные фрагменты, образовавшиеся за счет слияния
ацентрических участков двух хромосом. Эти случаи должны отмечаться
особо, если в клетках не было дицентриков, поскольку речь идет о
повреждении двух хромосом с неполным обменом. Ацентрические фрагменты
практически никогда не лежат рядом и на той же оси с фрагментированной
хромосомой. Благодаря этому их легко отличить от изохроматидных обменов.

“Точковые” фрагменты – парные округлые образования, без просвета в
середине, интенсивно окрашенные, диаметр не менее, чем поперечник
хроматиды.

Обе “точки” лежат рядом за счет притяжения сестринских хроматид. Если
фрагменты имеют длину или диаметр больше, чем поперечник хроматиды, то
считают, что это интерстициальный небольшой участок хромосомы,
замкнувшийся в маленькое ацентрические кольцо. Если фрагменты имеют
длину или диаметр меньше поперечника хроматиды, то такие фигуры относят
к парным фрагментам. Следует, однако, отметить, что строгих
доказательств такого деления нет.

Ацентрические кольца могут быть легко распознаны при их хорошем
распластывании на стекле. Иногда они располагаются боком. В этих случаях
для них характерны овальная форма и отсутствие просвета. Оба сестринских
кольца лежат рядом часто с наложением одного на другое в силу притяжения
идентичных участков сестринских хроматид.

Кольцевые хромосомы являются замкнутыми структурами, включающими участки
большей или меньшей величины обеих плеч. Они относятся к группе
внутрихромосомных обменов между двумя плечами. При большом количестве
повреждений могут образовываться и дицентрические кольцевые хромосомы.

Точный анализ хромосомных аберраций требует правильно отбирать клетки
для исследования и они должны отвечать следующим требованиям:

1) Все хромосомы должны быть хорошо прокрашены и равномерно разбросаны.

2) Не допускается наличие нескольких случайных хромосом в поле зрения.

3) Уровень конденсации хромосом должен находится в следующих пределах:

max – малые акроцентрические хромосомы видны в виде четко выраженных
структур, а не в виде точек, т.к. в таком случае их легко можно принять
за точечные фрагменты;

min – хромосомы разделены на две хроматиды и лежат отдельно друг от
друга.

4) Не допускается наличие в метафазных пластинках хромосом, вошедших а
анафазу, потому что их трудно отдиффиренцировать от парных фрагментов.

5) Не допускается анализ метафазных пластинок с большим количеством
наложений хромосом, особенно продольных, т.к. в таких случаях можно
определить большее количество обменных аберраций, чем имеется в
действительности.

6) Из-за технических манипуляций возможны потери хромосом в пластинке.
Обычно при учете хромосомных аберраций допускается анализ клеток с
числом хромосом от 44 до 47 (Бочков, 1971).

Данные цитогенетических исследований заносят в специальные
бланки-протоколы, где отличают число хромосом, общее

число проанализированных клеток, число клеток с аберрациями, общее число
аберраций, типы аберраций, а также зарисовки аберраций и их координаты.

1.2. Спонтанный хромосомный мутагенез.

Подразделение хромосомных аберраций на спонтанные и индуцированные
являются чисто условными. Так как возникновение любой аберрации
обусловлено определенными мутагенными факторами. О спонтанных
хромосомных аберрациях говорят в тех случаях когда точная причина их
возникновения неизвестна.

Закономерности спонтанных хромосомных аберраций достаточно полно изучены
в лаборатории мутагенеза Института медицинской генетики АМН на основе
исследований 531 культуры лимфацитов переферической крови 437 здоровых
лиц разного возраста и пола (Бочков и др., 1972).

Ниже приведены основные параметры спонтанных хромосомных аберраций в
лимфацитах крови человека. При исследовании более 60 тыс. клеток
обнаружено, что средняя частота клеток с хромосомными аберрациями
составляет 1,2%, а число аберраций на клетку не превышает 0,0124.
Сравнение этих показателей у лиц разного возраста и пола не выявило
существенных колебаний, т.е. частота спонтанных хромосомных аберраций
находится в одних и тех же пределах у индивидов мужского и женского пола
в возрасте от 0 до 70 лет. Среди обнаруженных аберраций более 90%
составили ацентрические фрагменты (одиночные и парные). Обменные
аберрации составили около 6-8%. Распределение исследованных культур по
частоте клеток с хромосомными аберрациями оказалось следующим: из 527
изученных культур 30,4% были без аберраций, 38,1% имели по одной
аберрантной метафазе и одной хромосомной аберрации, 19,9% – по две, 8,3%
– по три, 2,1% – по четыре, 0,4% – по пять, 0,6% – по шесть, 0,2% – по
семь. Таким образом, 96,7% исследуемых культур лимфоцитов от здоровых
лиц имели частоту аберрантных клеток и хромосомных аберраций в пределах
от 0 до 3. Это распределение культур соответствует теоретическому
распределению Пуассона, на основании чего можно сделать заключение о
том, что максимальный уровень клеток с хромосомными аберрациями в
культуре лимфоцитов человека в норме не превышает 3% (Захаров А.Ф.,
1992).

Некоторые авторы наблюдали у отдельных индивидов из контрольных выборок
клетки с необычно большим числом хромосомных аберраций. Интерпретация
таких находок не может быть однозначной, поскольку действие мутагенных
факторов трудно оценивать ретроспективно. Это могло быть действие
вируса, химического вещества, облучения или это могло быть результат
спонтанного мутагенного процесса (Бочков, 1989).

1.3. Специфичность и особенности химического мутагенеза.

Приоритет открытия большинства известных в настоящее время мутагенов, в
том числе и наиболее эффективных, широко используемых во всем мире, –
формальдегида, уретана, этиленимина, окиси этилена, диэтилсульфата,
диметилсульфата – принадлежит советскому генетику И.А. Рапопорту.

Исследования показали, что химические мутагены на несколько порядков
превышают активность радиации, часто обладают значительно более
специфическими и более тонким действием на клетку (Рапопорт И.А, 1966).

В настоящее время список химических мутагенов насчитывает десятки
веществ по числу главных функциональных центров и десятки в расчете на
их производные, вместе с тем накапливаются новые сведения о тонкостях
действия мутагенов, поэтому систематика их основанная на особенностях
химического строения, взаимодействия с генетическим материалом,
своеобразия биологического эффекта, представляет определенные трудности.

В классификации, которая нашла наиболее широкое распространение,
различают пять основных групп мутагенов:

1. ингибиторы синтеза предшественников нуклеиновых кислот.

2. аналоги азотистых оснований.

3. алкилирующие соединения (из всех обнаруженных на сегодняшний день
мутагенов они считаются наиболее сильными).

4. окислители, восстановители, свободные радикалы.

5. акридиновые красители.

Вредное генетическое действие химических препаратов трудноуловимо
-попытки оценить генетическую опасность химических веществ, находящихся
в окружающей среде, наталкиваются на очень серьезные трудности.

Бесчисленное множество химических мутагенов по разному взаимодействуют с
молекулой ДНК. Спектры их биологического действия различны. Хотя и
обнаруживают частичное перекрывание (Фогель, 1990).

Химические мутагены проходят через метаболистическую систему организма и
самыми непредсказуемыми путями превращаются в другие соединения. При
этом они могут потерять свою мутагенную активность, а могут приобрести
такие мутагенные свойства, которые отсутствовали у исходного соединения.
Особую опасность представляют не мутагенные химические вещества,
которые, включившись в метаболизм, превращаются в мутагены. Другие
трудности связаны с поглощением, распределением по разным системам
органов и выделением, или если выделение не возможно, накоплением этих
веществ (Ауэрбах, 1978).

Химические мутагены могут проявлять узкую специфичность в отношении
организмов и даже клеток одного и того же организма (впервые идея о
специфичности действия мутагенов была сформулирована И.А. Рапопортом ).

Химические агенты, которые мутагены для тест – объекта, не обязательно
окажутся мутагенными для человека. И наоборот, вещества, не вызывающие
мутации в контрольных опытах, могут вызывать их после метаболистических
превращений (Ауэрбах, 1978).

Обязательно надо учитывать комбинированное действие мутагенов (это не
просто суммарный эффект в их действии). Иногда при комбинированном
действии наблюдали изменение спектра мутаций, причем каждый мутаген в
отдельности не обладал способности к индукции мутаций определенного типа
(Засухин, 1971).

Другая трудность связана с кривыми доза – эффект. Для химических
мутагенов, действующих внутри клетки или организма, кривые доза – эффект
не выражают линейной зависимости; они могут иметь резкий подъем или быть
более пологими, а иногда бывают двух- или полифазными. Для мутагенного
действия некоторых химических веществ характерно наличие порога при
концентрации ниже некоторой определенной величины они не вызывают
мутаций (Ауэрбах, 1978). До сих пор не выяснена специфика действия малых
и острых доз. Имеются данные, что малые дозы в пересчете на единицу
энергии более эффективны в сравнении с острыми дозами (Дубинин, 1986).

Хромосомные аберрации, индуцированные химическими факторами возникают
почти исключительно в S – фазе независимо от того, на какой стадии цикла
клетка подвергалась воздействию. Т.е. большинство аберраций будут
хроматидного типа (Руководство по изучению генетических эффектов в
популяции человека, 1989), хотя для общей гипотезы и имеются исключения
(Evans Vijaylaxmi, 1980; Beston Gooch, 1981). Разрывы локализуются
главным образом в гетерохроматиновых районах (Прокофьева-Бельговская,
1986).

ГЛАВА II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Характеристика обследованных групп.

 В соответствии с поставленными задачами проведено
цитогенетическое обследование в группах девочек-подростков, проживающих
в с. Усманка и с. Дмитриевка Чебулинского района Кемеровской области. В
качестве группы сравнения была использована группа девочек близкого
возраста, проживающих в п. Крапивинский Кемеровской области – населенном
пункте не имеющем промышленных предприятий и интенсивного движения
транспорта. Всего обследовано 52 подростка (табл.1), в том числе 25
человек из Чебулинского района и 27 человека из Крапивинского.

Возраст обследованных в группе сравнения варьировал в пределах 14-17 лет
при среднем значении – 15,72 года; в группе девочек из Чебулинского
района средний возраст составил 14,4 лет при индивидуальных вариациях
13-15 лет (табл. 1).

ТАБЛИЦА 1

 Возрастная структура обследованных групп детей

ГруппаЧисло

обследованныхСредний возрастВариации

возрастаУсманка1214,713 – 15Дмитриевка1314,013 – 15Крапивино2715,714 –
17

-30-

Сбор анамнестических данных проводили путем устного анкетирования и
анализа индивидуальных медицинских карт. В исследование не включали
детей, подвергавшихся вакцинациям и рентгендиагностическим процедурам в
течение 3-х месяцев до сбора материала.

2.2. Культивирование крови, приготовление препаратов хромосом и анализ
цитогенетических нарушений.

  Материалом для исследования являлась цельная периферическая
кровь, которую забирали у доноров в асептических условиях, с немедленным
помещением в гепаринизированный флакон (0,5% раствор гепарина
ф.”Рихтер”). Посев культур проводили в течении суток после взятия крови.

Для анализа хромосом осуществляли подготовку препаратов с использованием
стандартного полумикрометода культивирования лимфоцитов [Hungerford et
al., 1965]. Фиксацию материала проводили в 3-х сменах охлажденного
этанол-уксусного фиксатора (3:1). Клеточную суспензию раскапывали на
чистые охлажденные, смоченные водой предметные стекла. Препараты сушили
над пламенем спиртовки, шифровали и окрашивали 2% раствором красителя
Гинзы.

Учет хромосомных аберраций проводили согласно общепринятым требованиям
[Бочков и др., 1972; Carrano, Natarajan, 1988]. Ахроматические пробелы
(гепы) в число аберраций не включали и учитывали отдельно. Для оценки
цитогенетических эффектов определяли общее количество аберраций и их
качественный спектр на 100 проанализированных метафаз от каждого донора.

Статистическую обработку фактического материала проводили с
использованием программы “STATISTICA for WINDOWS 5.0”; сравнение
экспериментальных групп выполняли методом непараметрической статистики
Манна-Уитни.

ГЛАВА III. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

 Дифференцированное кариотипирование, проведенное в изучаемых
группах, позволило установить наличие нормального кариотипа у всех
обследованных детей (46,ХХ).

Цитогенетический анализ уровня спонтанных хромосомных аберраций в
исследованных группах дал следующие результаты (табл.2). Из данных
приведенных в таблице 2 видно, что средние частоты спонтанной
повреждаемости хромосом в группах обследованных детей имеют существенные
различия, что прежде всего отражает неодинаковые экологические
параметры среды в сравниваемых районах. Так, уровень клеток с
хромосомными аберрациями в группе детей, проживающих в п.Крапивинcкий
составил в среднем 1,77±0,54%, что не превышает общепопуляционных
значений спонтанного мутагенеза, известных из литературы [Бочков,
Чеботарев, 1989; Gundy, Varga, 1983]. Таким образом, цитогенетический
анализ показал, что воздействие мутагенных факторов среды в п.
Крапивинском находится на фоновом уровне, а частота хромосомных
аберраций, установленная для группы сравнения, по видимому,
соответствует популяционному региональному уровню при отсутствии на
человека интенсивного антропогенного воздействия [Дружинин и др., 1995,
1997].

 Вместе с этим, в группах детей, проживающих в Чебулинском районе
были зарегистрированы средние частоты повреждаемости хромосомного
аппарата, которые значительно превышают аналогичные показатели в
выборке сравнения (табл.2). Наиболее неблагоприятные генотоксические
эффекты выявлены в группе

-33-

девочек из с. Усманка (9,96  2,88 %); несколько меньшее значение
характерно для группы детей из с. Дмитриевка (6,08  0,97%), однако и в
этом случае имеется достоверность различий по отношению к показателям
мутаций в группе сравнения (Р = 0,000092).

ТАБЛИЦА 2

Уровень цитогенетических нарушений в обследованных группах 

ГруппаЧисло

обследованныхЧисло аберраций

на 100 клеток, %,

(M±m)Пределы

вариаций, % – %Усманка129,96  2,880 – 35,3Дмитриевка136,08  0,971,3 –
13,7Крапивино271,77±0,540 – 12,5

* При сравнении выборок: “Усманка” и “Крапивино” Р = 0,000312;

“Дмитриевка” и “Крапивино” Р
= 0,000092;

“Усманка” и “Дмитриевка” Р =
0,707.

Обсуждая данные, приведенные в табл. 2, можно отметить, что большие
значения стандартной ошибки средней в группах детей из Чебулинского
района (2,88 для выборки “Усманка” и 0,97 для выборки “Дмитриевка”)
свидетельствуют о широкой вариабельности цитогенетического ответа на
мутагенное воздействие. Действительно, индивидуальные значения частот
хромосомных аберраций варьируют от минимальных показателей до 35,3%
аберрантных клеток. Этот факт говорит, с одной стороны, о существовании
индивидуальной чувствительности к генотоксическому действию. С другой
стороны, факт наличия очень высоких частот мутаций хромосом у отдельных
детей при полном или почти полном отсутствии мутагенного эффекта у
другой части обследованных позволяет предположить, что данные выборки
неоднородны по степени воздействия кластогенных факторов на отдельных их
представителей.

Известно, что ДНК-повреждающие агенты могут быть различной природы:
физической (все виды ионизирующего излучения), химической (химические
мутагены) и биологической (вирусы). Для выяснения причинности
наблюдаемых в той или иной популяции хромосомных нарушений важное
значение имеет анализ качественного спектра регистрируемых аберраций
[Бочков,1993]. Основанием для этого служит известный факт о наличии
специфики в типах образующихся аберраций, характерных для ионизирующего
излучения, по сравнению с аберрациями, вызываемыми химическими
мутагенами [Evans, 1982]. Под воздействием облучения в клетках чаще
возникают аберрации хромосомного типа, в частности – дицентрические
хромосомы, которые считаются испытанным индикатором мутагенного
воздействия радиоактивного излучения [Моссэ, 1990]. Такой анализ был
проведен на следующем этапе эксперимента; его результаты
представлены на рис.4.

Из гистограммы видно, что соотношение одиночных и парных фрагментов
хромосом является сходным в двух группах детей из разных сел
Чебулинского района (63%/24% для выборки “Усманка” и 67%/30% для выборки
“Дмитриевка”). Такое соотношение аберраций хроматидного и хромосомного
типа с явным превалированием первых над вторыми указывает на
преимущественно химическую природу генотоксических агентов, действующих
на детей из Чебулинского района. Вместе с тем, в качественном спектре
мутаций в выборках “Усманка” и “Дмитриевка” имеются и определенные
отличия. Так в выборке “Усманка” дицентрические хромосомы встречались с
частотой 0,870,52%, тогда как в выборке “Дмитриевка” аналогичный
показатель составил 0,250,13%. Следует отметить, что отмеченные частоты
дицентроческих хромосом (особенно у детей из с.Усманка) являются
достаточно высокими и превышают общепопуляционные значения этого типа
аберраций: 0,16% [Bender et al., 1988]. Можно предположить, что причиной
появления маркерных для лучевого воздействия мутаций хромосом у
обследованных детей из Чебулинского района является хроническое
воздействие малых доз радиации на данную популяцию. Это не кажется
странным ввиду достаточно близкого расположения с. Усманка от места
подземного испытания ядерного оружия (полигон расположен в 10-15 км. от
этого населенного пункта).

Основная компонента генотоксических эффектов, выявленных в группах детей
из Чебулинского района, все же имеет явную химическую природу и этот
факт заставляет искать источник вероятного химического загрязнения
среды. Так, например, в 5 километровой зоне от с. Усманка расположен
могильник ядохимикатов, причем условия хранения токсических веществ явно
не соответствуют нормативам. Можно предположить, что происходит
периодическая утечка токсикантов в окружающую среду, что и влечет за
собой появление выраженных мутагенных эффектов у детей, проживающих в
сельской местности. К настоящему времени можно лишь полагать, что данное
химическое соединение (соединения) помимо ДНК- повреждающей активности,
обладает колхициноподобным действием, разрушая веретено деления клетки,
что выражается в появлении большого числа мутаций геномного типа
полиплоидных клеток (рис.4).

Таким образом, результаты цитогенетического обследования
девочек-подростков, проживающих в с.Усманка и с. Дмитриевка
свидетельствуют о крайне неблагоприятной эколого-генетической
обстановке, имеющей место в этих населенных пунктах Чебулинского района,
причем причинами этого неблагополучия могут быть факторы как лучевой,
так и химической природы. Следствием высокого уровня мутаций может быть
увеличение заболеваемости населения района, особенно в части
нозологических форм, связанных с повышенной хромосомной нестабильностью:
онкопатологии, иммунодефицитные состояния, нарушение репродуктивной
функции. Медицинские и социальные последствия загрязнения окружающей
среды для жителей Чебулинского района должны стать предметом дальнейшего
изучения всех заинтересованных структур: административных, медицинских и
экологических.
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Выводы.

Результаты полученные в данной работе позволили сформулировать следующие
выводы:

1. Уровень хромосомных мутаций в лимфоцитах крови девочек-подростков,
проживающих в селах Усманка и Дмитриевка Чебулинского района достоверно
превышает аналогичный показатель в группе сравнения (п.Крапивинский).

2. Качественный спектр цитогенетических нарушений указывает на
сочетанное действие химических и радиационных факторов.

3. Вероятными причинами загрязнения окружающей среды в Чебулинском
районе Кемеровской области являются захоронение ядохимикатов и испытание
ядерного устройства.

4. Требуется дальнейшее изучение генетических последствий загрязнения
среды на территории Чебулинского района и факторов его вызывающих.

-39-

ЛИТЕРАТУРА

1. Ауэрбах Ш. Проблемы мутагенеза. – М.: Мир, 1978. – с. 443-444.

2. Беляев И.Я., Акифьев А.П. Генетические процессы и проблемы мишени в
хромосомном мутагенезе. //Генетика. – 1988. Т.24. №8. с. 1384-1392.

3. Бочков Н.П., Демин Ю.С., Лучник Н.В. Классификация и методы учета
хромосомных аберраций в соматических клетках // Генетика. 1972. Т. 8. №
5. С. 133-141.

4. Бочков Н.П., Чеботарев А.Н. Наследственность человека и мутагены
внешней среды. М.: Медицина, 1989. 272с.

5. Бочков Н.П. Анализ типов аберрантных клеток – необходимый элемент
биологической индикации облучения // Мед. Радиология. 1993. №2. С.
31-35.

6. Бочков Н.П. Генетические технологии в педиатрии. // Педиатрия. 1995.
№4. С. 21-24.

7. Захаров А.Ф. Хромосомы человека. М: «Медицина», 1977., с.80-81

8. Дружинин В.Г., Лифанов А.Ю., Головина Т.А., Ульянова М.В.
Цитогенетические эффекты у детей-подростков из разных районов
Кемеровской области // “Генетика”,1995, N7, С.983-987.

9. Дружинин В.Г., Лифанов А.Ю., Рытенков В.Ю. Цитогенетические
нарушения у детей-подростков из Кемеровской области как индикатор
экологического неблагополучия региона // “Генетика”, 1997. Т.33, N5,
С.699-703.

10. Дубинин Н.П. Потенциальные изменения в ДНК и мутации. Популярная
цитогенетика. М., 1978. с. 244.

11. Дубинина Л.П. Лейкоциты крови человека – тест система для оценки
мутагенов среды. – М.: Наука, 1977. – с. 116.

12. Митрофанов Ю.А., Олимпиенко Г.С. Индуцированный мутационный процесс
эукариот. М., 1980. с. – 264.

13. Рапопорт И.А. Супермутагены. – М.: Наука, 1966. – с. 5-8.

14. Руководство по изучению генетических эффектов в популяциях человека.
Всемирная организация здравоохранения. – Женева, – 1989 – с. 45.

15. Прокофьева-Бельговская А.А. Гетерохроматические районы хромосом. –
М.: Наука, 1986. – с. 209.

16. Фогель Д. Генетика человека. М.: Мир. 1990. 384с.

17. Bender MA, Preston RJ, Leonard RC, Pyatt BE, Gooch PC, Shelby MD
Chromosomal aberration and sister-chromatid exchange frequencies in
peripheral blood lymphocytes of a large human population sample// Mutat.
Res. 1988.;V.204(3):P.421-433.

18. Buckton K.E., Evans H.J. (Eds) Methods for the analysis of human
chromosome aberrations// WHO Report. Geneva. – 1973.

19. Carrano A.V., Natarajan A.T. Considerations for population
monitoring using cytogenetic techniques // Mutat. Res. 1988. V. 204.
P.379-406.

20. Evans H.I. Cytogenetic and allied studies in population exposed to
radiations and chemical agents // New York. 1985. P.429-451.

21. Ford C. E., Hamerton J. Z. 1996. The chromosomes of man. // Acta
genet. et. satist. med. v. 6,2,264.

22. Gundy S, Varga LP. Chromosomal aberrations in healthy persons.//
Mutat Res. 1983. V.120. P.187-191.

23. Hsy T.C., Powerat C.M. Mammalian chromosomes in vitro II A method
for spreading the chromosomes of cells in tissue culture. – J. Heredity
v. p. 23.

24. Hungerford P.A. Leukocytes cultured from small inocula of whole
blood and the preparation of metaphase chromosomes by treatment with
hypotonic KCl. // Stain Techn. 1965. V. 40. P. 333-338.

Tjio J.H., Levan A. The chromosome number of men. Hereditas. – 1956. –
V. 42 – p.16

Нашли опечатку? Выделите и нажмите CTRL+Enter

Похожие документы
Обсуждение

Ответить

Курсовые, Дипломы, Рефераты на заказ в кратчайшие сроки
Заказать реферат!
UkrReferat.com. Всі права захищені. 2000-2020